【方法】
方法一、基本的PCR方法
下面介紹的基本PCR方法可作為任何PCR擴增的一般指導和出發點。由于各種PCR反應條件（如PCR擴增次數、溫度、Taq DNA聚合酶的濃度、引物、氯化鎂以及模板DNA）變異極大，應根據具體情況，對各種PCR反應條件進行相應調整。
1．按以下次序，將各成分加入0.2 ml滅菌擴增管中：
成分 體積 終濃度
10 × PCR緩沖液 5 μl 1 ×
10 mM dNTP溶液(pH 8.0) 1 μl 每種0.2 mM
10 μM 上游引物 2.5 μl 0.5 μM
10 μM 下游引物 2.5 μl 0.5 μM
5單位/μl 耐熱DNA聚合酶 0.5 μl 2.5單位
DNA模板 1-10 μl 1 pg-1μg
消毒的蒸餾水 至50 μl
* 我們主張，對于多管反應可配制混合液于一管中，然后分裝至各管，以減少試劑損失和各管分別加樣的不準確性。
2．將小管中的混合物混勻，并加入50 μl礦物油或硅化油覆蓋小管中的混合物。
3．蓋緊小管，短暫離心，以使PCR混合物沉于管底。
4．小管在溫度循環器（PCR儀）中94oC溫育3分鐘，以使模板DNA完全變性。
5. 按以下方法進行25-35個循環的PCR擴增：
變性 94oC 30秒
退火 55oC 30秒
延伸 72oC 1分鐘/1 kb
6．72oC溫育PCR樣本10分鐘，可于4oC維持。樣本可貯存于-20oC直至使用。
7．采用瓊脂糖凝膠電泳分析PCR反應產物，溴化乙錠染色顯影DNA，用合適分子量標準的DNA作參照。
方法二、熱啟動方法
熱啟動PCR的方法是在反應溫度降至80oC時添加Taq DNA聚合酶，以保證高特異性PCR產物的合成。
1．如基本的PCR方法所述，添加所有的PCR反應的混合物，但不加Taq DNA 聚合酶。
2．將小管中的混合物混勻，并加入50 μl礦物油或硅化油覆蓋之。
3．蓋緊小管，短暫離心，以便于PCR混合物沉于管底。
4．小管在PCR儀中94oC溫育3分鐘，以使模板DNA完全變性。
5. 94oC溫育后，維持PCR反應在80oC。
6．每一PCR反應管添加0.5 μl (2.5 U)的 Taq DNA 聚合酶，注意應保證酶加入到油下面的PCR混合物中。
7．按照基本的PCR方法所述，繼續完成25-35個循環的變性、退火和延伸。