DNA探針的標記實驗

DNA

EGFR-PCR產物 washing buffer Detection buffer TE buffe

eppendorf管 Tip頭 PCR儀 鑷子 無粉手套 量加樣器

1.  滅菌去離子水稀釋1 ug DNA至總體積16 ul。

2.  DNA熱變性：DNA樣品于PCR儀中100℃變性10 min，后迅速置于碎冰中3 min 以上。

3.  加4 ul DIG-Random Labeling Mix，混勻后離心2000 rpm×5 min（4℃）。

4.  PCR儀37℃反應過夜。

5.  加2 ul EDTA終止反應，標記結束。標記物-20℃保存>1年
 

1.  用于標記的DNA模板盡可能純化，以提高標記效率

2.  模板DNA>100 bp。

3.  經DIG標記的探針不能用酚/氯仿抽提純化

4.  根據說明書確定標記效率（標記探針及試劑盒陽性對照DIG標記DNA梯度稀釋，尼龍膜點樣，樣本變性，封閉，雜交，現色定量）。

5.  本法亦可用于單鏈DNA或RNA探針的標記，當標記RNA探針時，需采用逆轉錄酶，收獲產物為標記的單鏈cDNA。

6.  可根據下表標記產物。