摘 要：采用高速逆流色譜(high-speed countercurrent chromatography，HSCCC)法從胡椒中分離制備胡椒堿。HSCCC的溶劑系統條件為正己烷- 乙酸乙酯- 甲醇- 水(1:1:1:1，V/V)。從5g 粗提物中可一次分離得到純度為98.72% 的胡椒堿單體1.58g，分離得到的胡椒堿結構經電噴霧質譜以及核磁共振氫譜(1H NMR)和碳譜(13C NMR)進行鑒定。該法制備量大、分離效率高，對胡椒堿在食品醫藥領域的應用具有重要意義。
高速逆流色譜( h i g h - s p e e d c o u n t e r c u r r e n tchromatography，HSCCC)技術是一種無固體載體的連續液- 液分配色譜技術，其固定相通過重力場和離心力場作用被保留在分離柱內[1-2]，可避免固體載體與樣品發生化學反應而變性及不可逆吸附，樣品回收率高，可從粗制樣品中規模制備高純度單體化合物，現已廣泛用于生化工程、醫藥、天然產物、食品等領域[ 3 - 4 ] 。在分離天然產物方面具有一般色譜技術所無法比擬的優勢[5]。
胡椒有“香料之王”的美稱，是世界上古老而著名的香料作物，廣泛用作廚房烹飪調味料。此外，在食品加工業上，胡椒可用作防腐劑來延長食品的保存期；在醫學上，胡椒可以作為驅風劑與退熱劑用來治療消化不良與普通感冒并有微弱的抗瘧作用[ 6 ]。胡椒堿(piperine)化學名為(E,E)-1-[5-(1,3- 苯并二氧戊環-5- 基)-1-氧代-2,4- 戊二烯基]- 哌啶(圖1)，是胡椒的主要活性成分之一，屬于桂皮酞胺類生物堿[ 7 - 8 ]，具多種藥理學活性[ 9 - 1 0 ]，對人體內一些藥物代謝的酶類有抑制作用，可以提高藥物的生物利用率[ 1 1 - 1 3 ]，具有抗驚厥作用，對電休克、戊四唑、印防己毒素、士的寧、筒箭毒堿和谷氨酸鈉引起的大鼠和小鼠驚厥均有不同程度
緩解作用，此外還有鎮靜作用和加強其他中樞神經系統制藥的中樞抑制作用，以及殺蟲、利膽、升壓、抗氧化[14- 15]等作用。
近些年對胡椒堿的生物活性和藥理作用研究非常活躍[16-17]，但是目前胡椒堿的分離純化方法主要是采用制備液相色譜法。該法操作成本高、制備量有限，建立相關的高效分離純化方法至關重要。本實驗運用HSCCC技術對胡椒提取物中的胡椒堿進行分離純化，能夠一次性分離得到大量高純度的單體，對其在醫藥食品領域的研究具有重要意義。