基本方案
| 實驗方法原理 |
L-谷氨酸:NAD(P)氧化還原酶(脫氨)。 L-谷氨酸+NAD(P)++H2O ? 2-酮戊二酸+NAD(P)H+NH4+ 實驗適用于逆反應,ADP 刺激反應進行。: |
|---|---|
| 實驗材料 | 酶樣品 |
| 試劑、試劑盒 | 咪唑緩沖液 酮戊二酸 乙酸銨 NADH EDTA ADP |
| 儀器、耗材 | 分光光度計 |
| 實驗步驟 |
實驗所需「試劑」具體見「其他」 0.098 ml 實驗混合物
0.02 ml LDH 稀釋溶液 25℃ 時,于 340 nm 處吸收值降低。NADPH的吸收系數 ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。
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| 注意事項 | |
| 其他 |
試劑: 0.1 mol/L 咪唑緩沖液,pH7.9(咪唑,Mr=68.1;稀釋 0.68 g 于 80 ml H2O,用 1 mol/L HCl 調節至 pH7.9) 0.2 mol/L 酮戊二酸(2-酮戊二酸,一鈉鹽,Mr=168.1,336 mg 溶于 10 ml 水中) 10 mol/L 乙酸銨(Mr=77.1;0.77 g 溶于 10 ml 水中) 0.01 mol/L NADH(二鈉鹽,Mr=709.4;71 mg 溶于 10 ml 水中) 0.1 mol/L EDTA(Mr=292.2;292 mg 溶于 10 ml 水中) 0.1 mol/L ADP(二鈉鹽,Mr=471.2;471 mg 溶于 10 ml 水中)
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