細菌中制備基因組DNA實驗

細菌

TE 氯化銫 溴化乙錠 NaCl 乙醇 CTAB

離心機 搖床

1.  培養5 ml 的細菌培養物至飽和狀態，取1.5 ml 的培養物離心2 min。

2.  沉淀物加入567 ul 的TE緩沖液，用吸管反復吹打使之重懸。

3.  加入30 ul 10%的SDS和3 ℃ 20 mg/ml蛋白酶K，混勻，于37℃溫育1 h。

4.  加入100 ul 5 mol/l NaCl充分混勻，再加入80 ul CTAB/NaCl溶液，混勻，于65℃溫育10 min。

5.  加入等體積的氯仿/異戊醇，混勻，離心4~5 min將上清液轉人一個新管中，如果難以移出上清，先用牙簽除去界面物質。

6.  加入等體積的酚/氯仿/異戊醇，混勻，離心5 min，將上清液轉入一只新管中。

7.  加入0.6體積異丙醇，輕輕混合直到DNA沉淀下來，用一個封口的巴斯德管將沉淀轉移至1 ml 的70%乙醇中洗滌。

8.  離心5 min，棄上清，用凍干機稍加干燥，重溶于的下100 ul  TE緩沖液，每次酶切反應用10~15 μl。