細胞治療之無血清細胞凍存

在細胞培養中，細胞凍存是最關鍵環節之一，尤其在細胞治療、細胞存儲中對細胞凍存更有特殊要求，下面就根據降溫速度以及凍存液組分對細胞凍存做詳細介紹。

根據降溫速度區分，細胞凍存可以分為程序降溫凍存與非程序降溫凍存。根據凍存方式不同可以分為慢速凍存（程序降溫法）與快速凍存（非程序降溫法）。

程序降溫凍存技術要點是慢凍，標準的凍存程序為降溫速率-1～-2/℃ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5 ℃～-10℃/min。之前，常用的傳統方法是將凍存管置于4 ℃30分鐘--->-20 ℃ 60分鐘--->-80 ℃過夜--->液氮罐。不過，由于步驟較多，間隔時間又長，很容易遺忘。之后，人們也開始使用程序降溫盒。將凍存管放入程序降溫盒中，再將程序降溫盒放入-80 ℃冰箱。以1 ℃/min的速度進行降溫。

快速凍存即不需要經過梯度降溫，直接將細胞放入-80 ℃冰箱24h，后轉入液氮長期凍存。快速凍存簡化了凍存步驟，同時不需要使用梯度凍存盒。

不同的凍存方法代表了不同的凍存體系，程序降溫法使用的凍存液主要配方為培養基、血清、DMSO。血清大多采用牛源，同時血清中未知成分和病毒等感染物質會給凍存帶來影響與風險，該方法科研上廣泛使用，并延續至今，但是顯然已經不能適應現今細胞治療的應用場景。

隨著細胞治療以及細胞儲存產業發展，細胞凍存也面臨從科研應用走向產業轉化。凍存要求發生改變，因為凍存細胞要進行臨床應用，所以凍存液成分由原來血清變為無血清，無動物源成分，凍存液中使用的所有原料均應符合臨床或藥物需求。隨著細胞凍存數量增加，凍存流程簡化也成為必然趨勢，因此無血清非程序降溫凍存液應運而生。