常用生化檢測項目分析方法舉例及參數設置

一、常用生化檢測項目分析方法舉例

1．終點法檢測　常用的有總膽紅素(氧化法或重氮法)、結合膽紅素(氧化法或重氮法)、血清總蛋白(雙縮脲法)、血清白蛋白(溴甲酚氯法)、總膽汁酸(酶法)、葡萄糖(葡萄糖氧化酶法)、尿酸(尿酸酶法)、總膽固醇(膽固醇氧化酶法)、甘油三酯(磷酸甘油氧化酶酶法)、高密度脂蛋白膽固醇(直接測定法)、鈣(偶氮砷Ⅲ法)、磷(紫外法)、鎂(二甲苯胺藍法)等。

以上項目中，除鈣、磷和鎂基本上還使用單試劑方式分析因而采用一點終點法外，其它測定項目 都可使用雙試劑故能選用兩點終點法，包括總蛋白、白蛋白測定均已有雙試劑可用。

2．固定時間法　苦味酸法測定肌酐采用此法。

3．連續監測法　對于酶活性測定一般應選用連續監測法，如丙氨酸氨基轉移酶、天冬氨酸氨基轉移酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、γ谷氨氨酰基轉移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。一些代謝物酶法測定的項目如己糖激酶法測定葡萄糖、脲酶偶聯法測定尿素等，也可用連續監測法。

4．透射比濁法　透射比濁法可用于測定產生濁度反應的項目，多數屬免疫比濁法，載脂蛋白、免疫球蛋白、補體、抗“O”、類風濕因子，以及血清中的其他蛋白質如前白蛋白、結合珠蛋白、轉鐵蛋白等均可用此法。

二、分析參數設置分析儀

一些通用操作步驟如取樣、沖洗、吸光度檢測、數據處理等，其程序均已經固化在存儲器里，用戶不能修改。各種測定項目的分析參數(analysis　parameter)大部分也已設計好，存于磁盤中，供用戶使用；目前大多數生化分析儀為開放式，用戶可以更改這些參數。

生化分析儀一般另外留一些檢測項目的空白通道，由用戶自己設定分析參數。因此必須理解各參數的確切意義。

(一)、分析參數介紹 A．必選分析參數

這類參數是分析儀檢測的前提條件，沒有這些參數無法進行檢測。

1．試驗名稱 試驗名稱(test code)是指測定項目的標示符，常以項目的英文縮寫來表示。

2．方法類型(也稱反應模式) 方法類型(assay)有終點法、兩點法、連續監測法等，根據被檢物質的檢測方法原理選擇其中一種反應類型。

3．反應溫度 一般有30℃、37℃可供選擇，通常固定為37℃。

4．主波長 主波長(primary wavelength)是指定一個與被測物質反應產物的光吸收有關的波長。

5．次波長 次波長(secondary wavelength)是在使用雙波長時，要指定一個與主波長、干擾物質光吸收有關的波長。

6．反應方向 反應方向(response direction)有正向反應和負向反應兩種，吸光度增加為正向反應，吸光度下降為負向反應。

7．樣品量 樣品量(sampling volum)一般是2μl～35μl，以0.1μl步進，個別分析儀最少能達到1.6μl。可設置常量、減量和增量。

8． 第一試劑量 第一試劑量(first regengt volum)一般是20～300μl，以1μl步進。

9． 第二試劑量 第二試劑量(second regengt volum)一般也是20～300μl，以1μl步進。

10．總反應容量 總反應容量(total reacting volum)在不同的分析儀有一個不同的規定范圍，一般是180～350μl，個別儀器能減少至120μl。總反應容量太少無法進行吸光度測定。

11．孵育時間 孵育時間(incubate

time)在終點法是樣品與試劑混勻開始至反應終點為止的時間，在兩點法是第一個吸光度選擇點開始至第二個吸光度選擇點為止的時間。

12．延遲時間 延遲時間(delay time)在連續監測法中樣品與反應試劑(第二試劑)混勻開始至連續監測期第一個吸光度選擇點之間的時間。

13．連續監測時間 連續監測時間(continuous monitoring

time)在延遲時間之后即開始，一般為60～120s，不少于4個吸光度檢測點(3個吸光度變化值)。

14．校準液個數及濃度 校準曲線線性好并通過坐標零點的，可采用一個校準液(calipator)；線性好但不通過坐標零點，應使用兩個校準液；對于校準曲線呈非線性者，必須使用兩個以上校準液。每一個校準液都要有一個合適的濃度。

15．校準K值或理論K值 通過校準得到的K值為校準K值(calipate coefficient)或由計算得出的K值為理論K值。

16．線性范圍 即方法的線性范圍(linearity range)，超過此范圍應增加樣品量或減少樣品量重測。與試劑/樣品比值有關。

17．小數點位數 檢測結果的小數點位數(decimal point digit)。