凝血因子的檢測

  凝血因子的檢測現在可以實現的有血漿纖維蛋白原（FIB）含量測定、血漿因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ的促凝活性測定、血漿因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ的促凝活性測定、血漿因子ⅩⅢ定性試驗和血漿因子ⅩⅢ亞基抗原測定。

　　1.血漿纖維蛋白原（FIB）含量測定

　　（1）原理：FIB檢測有凝血酶凝固法（Clauss法）、比濁法（PT衍生法）以及免疫學方法等。Clauss法：以凝血酶作用于待測血漿中的FIB，使其轉變為纖維蛋白，血漿凝固。血漿中FIB的含量與凝固時間成負相關，檢測結果與參比血漿制成的標準曲線對比可得出纖維蛋白原的含量。PT衍生法：當PT測定完成時，纖維蛋白原轉變為纖維蛋白，其形成的濁度與FIB的含量成正比，因此無需另加任何試劑，即可由產生的濁度，用終點法或速率法算出FIB含量。免疫學方法是利用抗FIB多克隆抗體與FIB特異性結合反應進行測定。方法有免疫濁度、單向免疫擴散和ELISA等。

　　（2）參考范圍：2～4g／L。

　　（3）臨床意義：增高見于糖尿病、急性心肌梗死、急性傳染病、結締組織病、急性腎炎、多發性骨髓瘤、休克、大手術后、妊高征、急性感染、惡性腫瘤和應急狀態等。降低：先天性低或無FIB血癥、遺傳性FIB異常、DIC、原發性纖溶癥、重癥肝炎和肝硬化等。

　　（4）方法學評價：Clauss法和PT衍生法：測定的是纖維蛋白原的功能，由于FIB的異質性，當FDP增高時，Clauss法測定結果會受到影響；免疫學方法測定的是纖維蛋白原的含量，但此法特異性不強，因為這些方法所針對的抗原決定簇也存在于纖維蛋白單體、FDPs和異常FIB中。

　　2.血漿因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ的促凝活性測定

　　（1）原理：一期法：將待測血漿分別與乏FⅧ、FⅨ、FⅪ和FⅫ基質血漿混合，進行APTT測定。將正常人混合血漿與乏因子血漿混合，測定APTT，作出標準曲線。從各自的標準曲線中分別計算出受檢血漿中FⅧ：C、FⅨ：C、FⅪ：C和FⅫ：C相當于正常人的百分率（%）。

　　（2）參考值：FⅧ：C 103%±25.7%；FⅨ：C 98.1%士30.4%；FⅪ：C 100%士18.4%；FⅫ：C 92.4%士20.7%。

　　（3）臨床意義

　　1）增高：主要見于血栓前狀態和血栓性疾病，如靜脈血栓形成、肺栓塞、妊高征、晚期妊娠、口服避孕藥、腎病綜合征、惡性腫瘤等。

　　2）減低：FⅧ：C減低見于血友病A、血管性血友病、血中存在因子Ⅷ抗體、DIC；FⅨ：C減低見于血友病B、肝臟病、維生素K缺乏癥、DIC、口服抗凝藥物；FⅪ：C減低見于因子Ⅺ缺乏癥、肝臟疾病、DIC等；FⅫ：C減低見于先天性因子Ⅻ缺乏癥、肝臟疾病、DIC和某些血栓性疾病等。

　　（4）注意事項

　　1）FⅧ：C在急性時相反應時可明顯升高，在嚴重肝實質損傷時，FⅧ：C可明顯升高。FⅧ：C減低時，需與vWF含量同時測定，以篩選出vWF缺陷的可能。

　　2）目前認為，凝血因子促凝活性測定不必等待逐級篩選和糾正試驗的結果，可以在單純APTT延長時檢測。

　　3）受檢標本檢測凝固時間不在標準曲線范圍可稀釋后檢測。

　　3.血漿因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ的促凝活性測定

　　（1）原理：將待測血漿分別與乏FⅡ、FⅤ、FⅦ和FⅩ基質血漿混合，進行PT測定。將正常人混合血漿與乏因子血漿混合，測定PT，作出標準曲線。從各自的標準曲線中分別計算出受檢血漿中FⅡ：C、FⅤ：C、FⅦ：C和FⅩ：C相當于正常人的百分率（%）。

　　（2）參考值：FⅡ：C：97.7%±16.7%；FⅤ：C：102.4%±30.9%；FⅦ：C：100%±l7.3%；和FⅩ：C：103%±l9. 0% 。

　　（3）臨床意義

　　1）增高：見于血栓前狀態和血栓性疾病。

　　2）減低：見于維生素K缺乏癥（FⅤ除外）、肝臟疾病、DIC、口服抗凝劑和血中存在相應的抑制物，先天性因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ缺乏癥較罕見。目前因子FⅡ：C、FⅤ：C、FⅦ：C和FⅩ：C的測定主要用于肝臟受損的檢查，因子Ⅶ：C在肝臟早期可下降，因子Ⅴ的測定在肝損傷和肝移植中應用較多。

　　4.血漿因子ⅩⅢ定性試驗

　　（1）原理：在鈣離子作用下，因子ⅩⅢ能使溶解于尿素溶液的可溶性纖維蛋白單體聚合物變為不溶性的纖維蛋白。因此，含因子ⅩⅢ的血漿鈣化凝固后不再溶于尿素溶液中，而缺乏ⅩⅢ的血漿則聚合物可溶于5mol／L尿素溶液中。

　　（2）參考范圍：24h內纖維蛋白凝塊不溶解。

　　（3）臨床意義：本試驗簡單、可靠，是十分有用的過篩試驗。在臨床上若發現傷口愈合緩慢、滲血不斷或懷疑有因子ⅩⅢ缺陷者，可首選本試驗。若纖維蛋白在24h內，尤其是2h內完全溶解，表示因子ⅩⅢ缺乏，見于先天性因子ⅩⅢ缺乏或獲得性因子ⅩⅢ缺乏，后者見于肝臟疾病、SLE、類風濕關節炎、惡性淋巴瘤、轉移性肝癌、DIC、原發性纖溶等。

　　5.血漿因子ⅩⅢ亞基抗原測定

　　（1）原理：凝血因子ⅩⅢ由兩個亞基α和β構成。檢測方法—免疫火箭電泳法：在含有FⅩⅢα亞基和β亞基抗血清的瓊脂凝膠板中，加入受檢血漿（抗原），在電場作用下，出現抗原-抗體反應形成的火箭樣沉淀峰，此峰的高度與受檢血漿中FⅩⅢ亞基的濃度成正比。根據沉淀峰的高度，從標準曲線中計算出FⅩⅢα：Ag和FⅩⅢβ：Ag相當于正常人的百分率。

　　（2）參考范圍：FⅩⅢα：Ag 100.4±12.9%，FⅩⅢβ：Ag 98.8±12.5%。

　　（3）臨床意義：同上。