光度準確度與光譜帶寬的關系

摘要：光譜帶寬是紫外分光光度計分析誤差的主要來源之一。一般來講，目前國內外的紫外分光光度計的儀器研究者或制造者，在給出AA或TA時，都不講明在什么光譜帶寬(SBW)條件下測量。這個問題很值得探討，應引起廣大紫外可見分光光度計的研制者和使用者們的高度視。

       光譜帶寬是紫外分光光度計分析誤差的主要來源之一。一般來講，目前國內外的紫外分光光度計的儀器研究者或制造者，在給出AA或TA時，都不講明在什么光譜帶寬(SBW)條件下測量。這個問題很值得探討，應引起廣大紫外可見分光光度計的研制者和使用者們的高度視。
A.J．Owen在1988年指出：“吸光度測量的準確度，取決于儀器的SBW與樣的自然帶寬(NBW)的比率。”（自然帶寬被定義為最大吸收值的1/2處的吸譜帶寬度）。Knowles和A．J．Owen在大量實驗的基礎上指出：SBW/NBW≤O．1時，吸光度準確度可高達99. 5%；如果SBW/NBW增大，則吸光度測量誤差會增加。A．J．Owen還指出，NBW≥20時，2nm的SBW對于吸光度的準確測定是足夠的，可滿足大約99%的日常分析。這也是我國藥典規定用于藥檢的紫外可見分光光度計的SBW一定要求≤2nm的主要原因。
筆者的研究也表明：光度準確度測量時，必須注意SBW的選擇。具體理由如下。
①SBW小，則對應的狹縫寬度小，此時的雜散光也小，可提高吸光度測量的準確度。
②SBW小，對同一自然帶寬(NBW)來講，波長準確度會高。因為不同的波長，有不同的摩爾吸光系數，所以，波長準確度高時，Beer定律的偏離也會小，即光度準確度測試誤差小。
③SBW小，則對應的狹縫窄，但單色光的單色性也好，更能接近單色光，可減少Beer定律的偏離，提高測量精度。
但必須注意：SBW不能太小，否則信號弱，儀器的信噪比小，靈敏度差。
不少儀器說明書中或在有關的儀器樣本中經常混淆狹縫寬度和光譜帶寬，這是很錯誤的，原因如下。
第一，狹縫寬度是指紫外可見分光光度計狹縫的機械寬度。一般來講，儀器的狹縫寬度是一個保密數據。因此，制造商不會或沒有必要在儀器說明書中、在有關的儀器樣本上給出儀器的狹縫寬度，所以講狹縫寬度為：多少是沒有根據的。
第二，儀器制造商應該或必須告訴用戶儀器的光譜帶寬是多少。因為光譜帶寬是紫外可見分光光度計分析誤差的主要來源，往往不同的試樣要求用不同的光譜帶寬測試。對試樣來講，有最佳光譜帶寬的要求。
我們必須指出：光譜帶寬以nm計，而狹縫寬度以mm計，二者在計量單位上相差100萬倍。