PCR(聚合酶鏈反應):類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。
基本原理:PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程,其特異性主要依賴于和靶序列兩端互補的寡核苷酸引物,它由變性——復性——延伸三個基本反應步驟構成。
所需材料:
模板DNA
正二價鎂離子
引物
反應緩沖液
TAQDNA聚合酶
拓展回答:
反應特點
特異性強。
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合。
②堿基配對原則。
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性。
④靶基因的特異性與保守性。
靈敏度高。
PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12)量級的起始待測模板擴增到微克(μg=-6)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中最小檢出率為3個細菌。
簡便、快速。
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
純度要求低。
不需要分離病毒或細菌及培養細胞,DNA 粗制品及RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活組織等DNA擴增檢測。