利用質粒pET22b + 為表達載體 ,成功構建了產 N2乙酰鳥氨酸脫乙酰基酶基因工程
菌BL212pET22b + 2argE ,并考察了重組質粒的穩定性。雙酶切鑒定了質粒構建正確 ,SDS2PAGE電泳證實了該菌可高效表達目的蛋白。連續傳代 50 次實驗表明重組質粒具有結構穩定性無選擇壓力連續傳代時 ,質粒丟失嚴重;有選擇壓力時連續傳代未發生質粒丟失現象 ,具有較好的分離穩定性。發酵過程中 ,用羧芐青霉素代替氨芐青霉素 ,質粒穩定率由 77.78%提高到 86.42%羧芐青霉素濃度為 200μ g/mL 時 ,質粒穩定率提高到 98.33%。
