要做qRT-PCR，但是不太清楚，1：濃度梯度是用來制作標準曲線的嗎？2：是不是內參和每個目的基因都要制作各自的標準曲線？也就是說如果我要作10個基因的話，就要制作內參加目的基因共11個標準曲線？3：怎么確定最適合的cDNA模板濃度呢？4：有說作3個生物學重復，是怎么做？
是的，標準曲線法是絕對定量法
不是，既然用到了內參，就是相對定量了
反轉錄的時候按照試劑盒的要求轉錄特定質量的RNA（RNA的濃度可以通過分光光度計測定），反轉完后按照推薦的比例稀釋產物即可，一般確保你要的基因的Ct值在20~25比較理想
對于同一類生物樣本，提取三份RNA（每份RNA都應包含若干不同的生物個體）并反轉錄，分別Q，這叫生物學重復；Q同一個基因的時候平行3個加樣孔，這叫技術重復