免疫印跡法的基本原理
與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。以固相載體上的蛋白質或多肽作為抗原，與對應的抗體起免疫反應，再與酶或同位素標記的第二抗體起反應，經過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達的蛋白成分。該技術也廣泛應用于檢測蛋白水平的表達。......閱讀全文
蛋白質印跡法的基本原理
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附
蛋白質印跡法的基本原理
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附
蛋白質免疫印跡（Western－Blot，WB－）——Western印跡法
實驗材料蛋白質樣品試劑、試劑盒裂解液PBSG 250考馬斯亮藍溶液NaClSDS上樣緩沖液電泳緩沖液轉移緩沖液麗春紅染液封閉液TBSTTBS洗脫抗體緩沖液顯影液定影液抗體化學發光試劑儀器、耗材高壓鍋玻璃勻漿器高速離心機分光光度儀-20℃低溫冰箱垂直板電泳轉移裝置恒溫水浴搖床多用脫色搖床實驗步驟一、操
免疫印跡的基本原理、實驗步驟及FAQ
01基本原理免疫印跡（Western Blot） 采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。SDS-PAGE 可對蛋白質樣品進行分離，轉移到固相載體——例如硝酸纖維素薄膜（NC）上。固相載體可以吸附蛋白質，并保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。
免疫印跡法檢測HIV的判斷標準
免疫印跡法判斷標準為：①HIV抗體陽性：至少有兩條膜帶（gp41/gp120/gp160）或至少一條膜帶與p24帶同時出現；②HIV抗體陰性：無HIV抗體特異性條帶出現；③HIV抗體可疑：出現HIV特異性條帶，但帶型不足以確認陽性者。
免疫印跡法的原理和基本步驟
免疫印跡法分三個階段進行.第一階段為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE):抗原等蛋白樣品經SDS處理后帶陰電荷,在聚丙烯酰胺凝膠中從陰極向陽極泳動,分子量越小,泳動速度就越快.此階段分離效果肉眼不可見(只有在染色后才顯出電泳區帶).第二階段為電轉移:將在凝膠中已經分離的條帶轉移至硝酸纖維素
免疫印跡法的技術特點和應用
免疫印跡法 (Western Blot) 是一種將高分辨率凝膠電泳和免疫化學分析技術相結合的雜交技術。免疫印跡法具有分析容量大、敏感度高、特異性強等優點，是檢測蛋白質特性、表達與分布的一種最常用的方法，如組織抗原的定性定量檢測、多肽分子的質量測定及病毒的抗體或抗原檢測等。免疫印跡法 (immunob
免疫印跡法的基本操作和介紹
SDS-PAGE和免疫印跡 一：蛋白質的提取 1、取出細胞，倒去培養液，用PBS洗滌細胞一次，充分除去PBS液體，把細胞置于冰上。配置細胞裂解液，細胞裂解液用滅菌水配置，然后按照1：100比例加入PMSF混勻，然后按照細胞的多少加入裂解液于培養瓶中，在冰上放置20min。在此期間每隔3-5m
免疫印跡法的操作步驟有哪些
一蛋白質樣品獲得：細菌誘導表達后，可通過電泳上樣緩沖液直接裂解細胞，真核細胞加勻漿緩沖液，機械或超聲波室溫勻漿0.5-1min。然后4℃，13,000r離心15min。取上清液作為樣品。 二電泳：制備電泳凝膠，進行SDS-PAGE。 三轉移：（半干式轉移） 1、電泳結束后將膠條割至合適大小
免疫印跡法所需試劑有哪些？
1、SDS-PAGE試劑：見電泳實驗。2、勻漿緩沖液：1.0M Tris-HCl(pH 6.8)1.Oml；10%SDS 6.0ml；β-巰基乙醇?0.2ml；ddH2O 2.8ml。3、轉膜緩沖液：甘氨酸?2.9g；Tris 5.8g；SDS 0.37g；甲醇200ml；加ddH2O定容至1000
表達蛋白檢測實驗_免疫印跡法
實驗方法原理當重組病毒通過噬斑純化和擴增后，免疫印跡可用于鑒定重組蛋白，并檢測其是否有預期的大小以及是否從感染細胞中分泌。下面的步驟是介紹檢測非分泌性（細胞內）蛋白的，如果重組蛋白是分泌到培養基中的，可按注解中的步驟操作。實驗材料生長至匯片的單層 BS-C-1 細胞重組痘苗病毒儲液試劑、試劑盒完全
免疫印跡法檢測HIV判斷標準
免疫印跡法判斷標準為：①HIV抗體陽性：至少有兩條膜帶（gp41/gp120/gp160）或至少一條膜帶與p24帶同時出現；②HIV抗體陰性：無HIV抗體特異性條帶出現；③HIV抗體可疑：出現HIV特異性條帶，但帶型不足以確認陽性者。
表達蛋白檢測實驗_免疫印跡法
實驗方法原理當重組病毒通過噬斑純化和擴增后，免疫印跡可用于鑒定重組蛋白，并檢測其是否有預期的大小以及是否從感染細胞中分泌。下面的步驟是介紹檢測非分泌性（細胞內）蛋白的，如果重組蛋白是分泌到培養基中的，可按注解中的步驟操作。實驗材料生長至匯片的單層 BS-C-1 細胞重組痘苗病毒儲液試劑、試劑盒完全
蛋白質印跡法的基本原理介紹
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式
Southern－印跡實驗——印跡法
Southern印跡法是將DNA片段從電泳凝膠中轉移至膜支持物上，使DNA片段固定，因此該膜半永久性地重現出凝膠電泳的帶型。實驗方法原理本方案是專門為將瓊脂糖凝膠印跡至不帶電荷或帶正電荷的尼龍膜上而設計的，稍作修改后同樣可用于硝酸纖維素膜方法。實驗材料DNA試劑、試劑盒HClNaClTrisNaOH
免疫印跡法實驗的操作注意事項
1、一抗、二抗的稀釋度、作用時間和溫度對不同的蛋白要經過預實驗確定最佳條件。2、顯色液必須新鮮配置使用，最后加入H2O2。3、DAB有致癌的潛在可能，操作時要小心仔細。
免疫印跡法的三個階段介紹
免疫印跡法分三個階段進行.第一階段為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）：抗原等蛋白樣品經SDS處理后帶陰電荷，在聚丙烯酰胺凝膠中從陰極向陽極泳動，分子量越小，泳動速度就越快.此階段分離效果肉眼不可見（只有在染色后才顯出電泳區帶）。第二階段為電轉移：將在凝膠中已經分離的條帶轉移至硝酸纖維素
疏水柵格濾膜免疫印跡法介紹
樣品經選擇性增菌后，培養物經疏水柵濾膜（HGM）過濾，然后將濾膜合在預先經抗?E.coli O157：H7?血清處理的硝酸纖維膜上放在選擇性瓊脂平板上進行培養，培養后目標菌落在膜上留下免疫印跡。該方法的靈敏度據悉可達1.5cfu/g。但其操作較復雜，而且與多種革蘭氏陰性桿菌有交叉。另有人建立一種?E
免疫印跡法試驗操作注意事項
1、一抗、二抗的稀釋度、作用時間和溫度對不同的蛋白要經過預實驗確定最佳條件。2、顯色液必須新鮮配置使用,最后加入H2O2。3、DAB有致癌的潛在可能,操作時要小心仔細。
免疫印跡法的操作步驟及注意事項
操作步驟 一蛋白質樣品獲得：細菌誘導表達后，可通過電泳上樣緩沖液直接裂解細胞，真核細胞加勻漿緩沖液，機械或超聲波室溫勻漿0.5-1min。然后4℃，13,000r離心15min。取上清液作為樣品。 二電泳：制備電泳凝膠，進行SDS-PAGE。 三轉移：（半干式轉移） 1、電泳結束后將膠條
wb免疫印跡法的主要顯色方法有哪些
Western免疫印跡（WesternBlot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。 western顯色的方法主要有以下幾種： i.放射自顯影 ii.底物化學發光ECL iii.底物熒光E
Western印跡法
這種技術是把電泳分離的組分從凝膠轉移到一種固相支持體，并以針對特定氨基酸序列的特異性試劑作為探針檢測之。Western使用的探針是抗體，它與附著于固相支持體的靶蛋白所呈現的抗原表位發生特異性反應。這種技術的作用是對非放射性標記蛋白組成的復雜混合物中的某些特異蛋白進行鑒別和鑒定。儀器：高壓鍋、玻璃勻漿
Western－Blot(免疫印跡法)實驗方法步驟
Western Blot(免疫印跡法)主要包括以下4個基本步驟：n?????樣品制備n??? ?電泳分離n??? ?蛋白的膜轉移n??? ?免疫雜交與顯色――蛋白檢測溶液和試劑n??? 1X 磷酸鹽緩沖液(PBS)n??? Modified RIPA bufferTris-HCl: 50 mM, p
免疫濁度法的基本原理
當可溶性抗原與相應抗體在兩者比例合適時，抗原抗體在特殊緩沖液中快速形成抗原抗體復合物，使反應液出現濁度，如形成的復合物增加，反應液的濁度隨之增加，與一系列的標準品對照，即可計算出受檢物的含量。按照儀器設計的不同，分為透射比濁儀測定法和散射比濁儀測定法。
免疫比濁法的基本原理
免疫比濁法（Turbidimetric inhibition immuno assay）是抗原抗體結合動態測定方法。其基本原理是：當抗原與抗體在特殊稀釋系統中反應而且比例合適(一般規定抗體過量)時，形成的可溶性免疫復合物在稀釋系統中的促聚劑（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反應液出現濁
免疫濁度法的基本原理
當可溶性抗原與相應抗體在兩者比例合適時，抗原抗體在特殊緩沖液中快速形成抗原抗體復合物，使反應液出現濁度，如形成的復合物增加，反應液的濁度隨之增加，與一系列的標準品對照，即可計算出受檢物的含量。 按照儀器設計的不同，分為透射比濁儀測定法和散射比濁儀測定法。
酶聯免疫法的基本原理
①使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合
免疫比濁法的基本原理
免疫比濁法（Turbidimetric inhibition immuno assay）是抗原抗體結合動態測定方法。其基本原理是：當抗原與抗體在特殊稀釋系統中反應而且比例合適(一般規定抗體過量)時，形成的可溶性免疫復合物在稀釋系統中的促聚劑（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反應液出現濁
免疫印跡的優點
免疫印跡法是一項分析抗原、抗體的技術。它具有下列優點：1、 濕的固定化基質膜柔韌, 易于操作；2 、固定化的生物大分子可均一的與各種免疫探針接近, 不會象凝膠那樣受孔徑阻隔；3、 免疫印跡分析只需少量試劑；4、 孵育、洗滌的時間明顯減短；5、可同時制作多個拷貝, 用于多種分析和鑒定；6、結果以圖譜形
免疫印跡優點
免疫印跡法是一項分析抗原、抗體的技術。它具有下列優點： 1、 濕的固定化基質膜柔韌, 易于操作； 2 、固定化的生物大分子可均一的與各種免疫探針接近, 不會象凝膠那樣受孔徑阻隔； 3、 免疫印跡分析只需少量試劑； 4、 孵育、洗滌的時間明顯減短； 5、可同時制作多個拷貝, 用于多種分析