原位PCR實驗的大致過程
大致過程 實驗用的標本是新鮮組織、石蠟包埋組織、脫落細胞、血細胞等。其基本方法為多聚甲醛固定組織或細胞，蛋白酶消化處理組織；在組織細胞片上滴加PCR反應液進行擴增，覆蓋并加液體石蠟后，在原位PCR儀上進行PCR循環擴增，PCR擴增結束后用標記的探針進行原位雜交，最后顯微鏡觀察結果。 實驗玻片的處理 清潔液清洗→自來水沖，烘干→強酸24h→自來水，蒸餾水洗，烘干95%乙醇數小時→烘干，高壓消毒。再用多聚賴氨酸APES(3-氨丙基三乙氧硅烷)包被。 固定液的選擇標準：保持組織結構，最大限度地保持細胞內DNA或RNA水平，使引物和探針更易于進入細胞內，在規定的時間內進行反應。......閱讀全文
DNA和RNA靶序列的原位PCR擴增實驗
原位PCR是Hasse等于1990年建立的技術，就是在組織細胞里進行PCR反應，它結合了具有細胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術的優點，是細胞學科研與臨床診斷領域里的一項有較大潛力的新技術。實驗材料樣品試劑、試劑盒雙氧水PBS蛋白酶KRNA酶DTTdNTPKClMgCl2Tris·Cl儀
原位PCR的基本方法
①固定組織或細胞:將組織細胞固定于預先用四氟乙烯包被的玻片上，并用多聚甲醛處理，再滅活除去細胞內源性過氧化物酶.②蛋白酶K消化處理:用60ug/ml的蛋白酶K將固定好的組織細胞片55℃消化處理2h后，96℃2min以滅活蛋白酶K.③PCR擴增:在組織細胞片上，加PCR反應液，覆蓋并加液體石蠟后，直接
原位PCR的反轉錄
原位PCR的反轉錄不同于原位PCR的過程包括兩個：即蛋白酶消化后用無RNA酶的DNA酶消化過夜和原位PCR的反轉錄過程。此處主要介紹這兩個過程，其余方法同原位PCR。1．DNA酶消化【試劑與配制】無RNA酶的DNA酶10×緩沖液：35μl 3mol/L NaAc，5μl 1mol/L MgSO4，6
原位PCR的應用范圍
組織處理的要求 處理后的標本，既要保持組織，細胞的形態結構，并增加細胞膜通透性，又要充分暴露擬擴增的目的DNA或RNA，使引物、探針能有效進入胞漿中發生反應。 應用范圍 主要應用于兩方面： （1）檢測外源性基因片段，提高檢出率，集中在病毒感染的檢查上，如HIV、HPV、HBV、CMV等；
普通PCR梯度PCR－原位PCR－熒光定量PCR儀的區別
普通PCR儀： 一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀，稱之為普通PCR儀，也就是傳統的PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。如；（ABI 2720） 梯度PCR儀： 一次性PCR擴增可以設置一系列不同的退火溫度條件（通常12種溫度梯度）的稱
原位PCR的優勢和不足
PCR雖然能擴增包括福爾馬林固定、石蠟包埋組織的各種標本的DNA，但擴增的DNA或RNA產物不能在組織細胞中定位，因而不能直接與特定的組織細胞特征相聯系，這是該技術一個局限性。原位雜交雖具有良好的定位能力，但由于其敏感性問題，尤其是在石蠟切片中，尚不能檢測出低含量的DNA或RNA序列。而原位PC
直接原位PCR（In－situ－PCR）操作方法
原位PCR是原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術，使得靶基因檢測有了極大的改進。此技術是在細胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對靶基因片段進行擴增，通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法。1．組織切片和細胞樣品的制備【試劑與配置】10%福爾馬林二甲苯PBS【
PCR實驗過程中常見的問題分析
開展 PCR 應具有一定的條件。需要一個正規的 pCR 實驗室,采集標本、核酸提取、擴增及產物分析應在不同的房間進行；需有嚴密的防污染措施、假陽性和假陰性結果的質控等。實驗者應具有一定的分子生物學理論知識及實驗技能,能夠及時發現和糾正實驗中的問題。目前,我國在 PCR 應用中尤其是在臨床診斷中存
PCR實驗過程中的注意事項
PCR產物的電泳檢測時間 一般為48h以內,有些最好于當日電泳檢測,大于48h后帶型不規則甚至消失.PCR反應的關鍵環節有①模板核酸的制備,②引物的質量與特異性,③酶的質量及, ④PCR循環條件.尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究.酶切分析：根據PCR產物中限制性內切酶的位點,用相應的酶切、電
原位免疫PCR的IHC增敏方法
（一）基本原理 Sano等（1992）率先利用基因工程的方法表達了A蛋白與鏈霉親和素的嵌合體分子獲得成功，建立了免疫PCR技術。這是一種新的抗原檢測系統，利用細胞工程和基因工程技術，巧妙地將抗原抗體反應的特異性同PCR的敏感性相結合，通過構建單克隆抗體與重組核酸的嵌合體分子，使得利用PCR技術檢
原位PCR技術的定義和方法介紹
1.概述：原位PCR就是在組織細胞里進行PCR反應，它結合了具有細胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術的優點，是細胞學科研與臨床診斷領域里的一項有較大潛力的新技術。原位PCR是Hasse等于1990年建立的，實驗用的標本是新鮮組織、石蠟包埋組織、脫落細胞、血細胞等.2.其基本方法為? ?
標準的PCR過程
DNA變性：（90℃-96℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA退火：（60℃-65℃）：系統溫度降低，引物與DNA模板結合，形成局部雙鏈。延伸：（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP為原料，從引物的3′端開始以從5′→3′端的方向延伸，合成與
肽酶大致分類
根據催化類型可將肽酶大致分成六類：絲氨酸型、蘇氨酸型、半胱氨酸型、天冬氨酸型、谷氨酸型和金屬離子型肽酶。
普通PCR儀/梯度PCR儀/實時熒光定量PCR儀/原位PCR儀應用對比
PCR：聚合酶鏈式反應。是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點，是能將微量的DNA大幅增加。PCR原理示意圖：PCR儀的種類有：常規的普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR儀，實時熒光定量PCR儀四類！1、普通PCR儀一般把一次PCR
普通PCR儀/梯度PCR儀/實時熒光定量PCR儀/原位PCR儀應用對比
PCR：聚合酶鏈式反應。是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA復制，PCR的最大特點，是能將微量的DNA大幅增加。 PCR原理示意圖： 1589863475231958.jpg PCR儀的種類有：常規的普通PCR儀，梯度P
PCR擴增過程
①首先是將含有待擴增DNA樣品的反應混合物放置在高溫（>91℃）環境下加熱1分鐘,使雙鏈DNA變性,形成單鏈模板DNA；②降低反應溫度（約50℃）,致冷1分鐘,使寡核苷酸引物與兩條單鏈模板DNA發生退火作用并結合在靶DNA區段兩端的互補序列位置上;③將反應混合物的溫度上升到72左右保溫1-數分鐘,在
PCR擴增過程
①首先是將含有待擴增DNA樣品的反應混合物放置在高溫（>91℃）環境下加熱1分鐘，使雙鏈DNA變性，形成單鏈模板DNA；②降低反應溫度（約50℃），致冷1分鐘，使寡核苷酸引物與兩條單鏈模板DNA發生退火作用并結合在靶DNA區段兩端的互補序列位置上;③將反應混合物的溫度上升到72左右保溫1-數分鐘，在
動物實驗基本操作技術之三“年齡的大致判斷”
一、大、小鼠1、根據形態鑒定日齡（大、小情況基本一樣）?2、根據體重鑒定日齡⑴ 小鼠日齡與體重的對應⑵ 大鼠日齡與體重的對應二、豚鼠一般老年豚鼠牙齒和趾爪長，被毛稀疏無光澤，眼神呆滯，行動遲緩。而年輕豚鼠牙齒短白，爪短軟，眼睛圓亮，行動敏捷，被毛有光澤，且緊貼身體。同樣，也可根據體重來推斷大致年齡。
PCR擴增產物鑒定與純化實驗原理及實驗過程
?實驗原理瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。（原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗）本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒（Agarose Gel DNA Purification Kit），該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統，結合DNA制備膜技
PCR擴增產物鑒定與純化實驗原理及實驗過程
實驗原理瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR擴增產物。（原理參照瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA實驗）本實驗使用了TaKaRa公司的膠純化試劑盒（Agarose Gel DNA Purification Kit），該試劑盒是從瓊脂糖凝膠中回收并純化DNA片段的試劑盒。試劑盒采用了獨特的凝膠融解系統，結合DNA制
進口pcr管實驗過程中的注意事項
一、進口pcr管實驗過程中的注意事項： 實驗操作注意事項盡管擴增序列的殘留污染大部分是假陽性反應的原因，樣品間的交叉污染也是原因之一，因此，不僅要在進行擴增反應是謹慎認真，在樣品的收集、抽提和擴增的所有環節都應該注意。 1、戴一次性手套，若不小心濺上反應液，立即更換手套。 2、使用一次性吸
原位雜交儀—原位雜交實驗（二）
原位雜交第二天 1. 1）將探針回收，放于－20C保存（通常探針可重復使用十次左右）。 2）加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升，60℃，放置30分鐘，重復一次。 3）置換2XSSCT1ml，60℃，放置15分鐘。 4）置換0.2XSSCT1ml，60℃，放置30分鐘，重復一次。
原位雜交儀—原位雜交實驗（三）
原位雜交第三天 1） 用1ml含10%熱滅活血清的MABT溶液置換抗體溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時以上，最后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。 2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置
原位聚合酶鏈式反應（in－situ－PCR）和原位反轉錄
一、儀器設備英國Thermo Hybaid原位PCR儀。二、操作流程（一）原位PCR步驟1、預處理： （1）切片常規脫蠟； （2）0.2mol/L HCl處理10min； （3）5μg/ml蛋白酶K消化組織37℃10min； （4）Nase消化組織37℃ 30min； （5）梯度酒精脫水，
標準的PCR過程介紹
1、DNA變性 （90℃-96℃）：雙鏈DNA模板在熱作用下，氫鍵斷裂，形成單鏈DNA 2、退火 （60℃-65℃）：系統溫度降低，引物與DNA模板結合，形成局部雙鏈。 3、延伸 （70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP為原料，從引物的3′端開始以從
PCR測序的方法過程
PCR測序根據標記的方式不同和循環的次數不同可分為直接測序法和循環測序法。
實驗室分析方法質譜的解析大致步驟
1、確認分子離子峰,并由其求得相對分子質量和分子式;計算不飽和度。2、找出主要的離子峰(一般指相對強度較大的離子峰),并記錄這些離子峰的質荷比(m/z值)和相對強度。3、對質譜中分子離子峰或其他碎片離子峰丟失的中型碎片的分析也有助于圖譜的解析。4、用MS-MS找出母離子和子離子,或用亞穩掃描技術找出
紅外光譜分析一粉末樣品的大致操作過程
紅外光譜分析一粉末樣品的大致操作過程：1）將樣品和溴化鉀烘干，防止水分出現干擾峰。2）將烘干溴化鉀取一角匙放到瑪瑙研缽里，同時挑一點樣品一起研磨，磨細，并混合均勻。3）將磨好的樣品放到模具里，壓片，壓出的片應該是接近透明的均勻的薄片。4）將薄片放到紅外光譜分析儀上，就可以分析了。講究一些的，還有專用
pcr過程是什么
pcr過程是包括高溫變性，低溫退火，中溫延伸三個不同的事件。變性加熱使模板DNA在高溫下雙鏈間的氫鍵斷裂而形成兩條單鏈。退火使溶液溫度降至50到60℃，模板DNA與引物按堿基配對原則互補結合，延伸溶液反應溫度升至72℃，耐熱DNA聚合酶以單鏈DNA為模板，在引物的引導下，利用反應混合物中的4種脫氧核
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pcr過程是包括高溫變性，低溫退火，中溫延伸三個不同的事件。變性加熱使模板DNA在高溫下雙鏈間的氫鍵斷裂而形成兩條單鏈。退火使溶液溫度降至50到60℃，模板DNA與引物按堿基配對原則互補結合，延伸溶液反應溫度升至72℃，耐熱DNA聚合酶以單鏈DNA為模板，在引物的引導下，利用反應混合物中的4種脫氧核