植物線粒體制備及其亞結構分級分離實驗（二）
3.5 純度鑒定可以通過各種細胞器標志性酶的活性來確定線粒體的污染程度。過氧化物酶體可以鑒定過氧化氫酶、羥基丙酮酸還原酶或者乙二醇氧化酶的活性；葉綠體可以用葉綠素含量，白色體可以用類胡蘿卜素的含量或堿性焦磷酸酶的活性；乙二醛循環體可以用異檸檬酸裂解酶的活性；內質網可以用對抗霉素 A 不敏感的細胞色素 C 還原酶；質膜可以用 K+/ATPase 活性等來確定各種細胞器對線粒體的污染程度。經過仔細地密度梯度離心后，一般來自胞質的污染比較少，即使有污染，也可以通過測定乙醇脫氫酶的活性來確定。有關各種標志酶活性的測定方法可以參考文獻 [ 1 ] 和文獻 [7]。其他線粒體純度相關事項可以參考注釋 7。3.6 線粒體完整性鑒定分離出的線粒體可以通過各種方法來確定其結構的完整性。外膜的完整性通過其對外源細胞色素 C 的不通透性來確定。施加非離子變性劑（0.05% m/V Triton X-100 ) 前后細胞色素 C 氧化酶......閱讀全文
細胞和亞細胞提取物的制備實驗
從組織和細胞中提取蛋白可能是蛋白質組研究中最關鍵的一步，因為這一步影響了蛋白的產率、生物活性和特定目的蛋白結構的完整性。因此，我們要注意蛋白提取條件的選擇。主要目標是在破壞力最小、保持蛋白結構完整性的前提下，可重復地使細胞最大程度地裂解。方案1 哺乳動物組織的勻漿實驗實驗方法原理對于細胞內蛋白的純化
細胞和亞細胞提取物的制備實驗
方案1 哺乳動物組織的勻漿實驗 方案2 用于免疫沉淀的培養細胞的裂解實驗 方案3 用于免疫印跡的動物培養細胞、酵母和細菌的裂解實驗 方案4 氮艙減壓法裂解培養細胞實驗 方案5 細菌中重組蛋白的小量提取實驗 方案6 細菌中重組蛋白的
亞細胞結構的分離與鑒定1
細胞由各種亞細胞結構組成。其重要的研究手段之一是分離純化亞細胞組分，觀察它們的結構或進行生化分析。離心技術是實現這一目標的基本手段。一般認為，轉速為10～25Kr/min的離心機稱為高速離心機；轉速超過25Kr/min，離心力大于89Kg者稱為超速離心機。目前超速離心機的最高轉速可達100Kr/mi
蕨類植物鑒定實驗——鑒定桉葉亞門
實驗材料石松標本卷柏（或中華卷柏）臘葉標本石松莖橫切片石松卷柏孢子葉穗縱切片問荊（或節節草）新鮮葉片（或臘葉標本）蕨臘葉標本蕨地下莖橫切片蕨孢子囊群水封 片（或永久封片）蕨原葉體裝片常見蕨類植物的標本。儀器、耗材顯微鏡解剖鏡放大鏡鑷子解剖針載玻片蓋玻片培養皿滴瓶實驗步驟（二）桉葉亞門 Sphenop
蕨類植物鑒定實驗——真蕨亞門鑒定
實驗材料石松標本卷柏（或中華卷柏）臘葉標本石松莖橫切片石松卷柏孢子葉穗縱切片問荊（或節節草）新鮮葉片（或臘葉標本）蕨臘葉標本蕨地下莖橫切片蕨孢子囊群水封 片（或永久封片）蕨原葉體裝片常見蕨類植物的標本儀器、耗材顯微鏡解剖鏡放大鏡鑷子解剖針載玻片蓋玻片培養皿滴瓶等實驗步驟（三）真蕨亞門 Filicop
植物組織制備基因組DNA實驗
實驗方法原理?加入一定量的異丙醇或乙醇，基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中， 可用玻棒將其取出，而小分子DNA則只形成顆粒狀沉淀附于壁上及底部， 從而達到提取的目的。實驗材料?植物組織試劑、試劑盒?抽提緩沖液十二烷基肌氨酸鈉TE異丙醇溴化乙錠氯化銫儀器、耗材?離心機實驗步驟 ? 收取1
植物組織制備基因組DNA實驗
氯化銫法 CTAB法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 加入一定量的異丙醇或乙醇，基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中， 可用玻棒將其取出，而小分子DNA則
植物RNA的制備實驗——酚/SDS法
由于RNA的種類來源很多，因而提取制備方法各異，一般有苯酚法，去污劑法和鹽酸胍法，其中苯酚法實驗室最常用。組織勻漿后用苯酚處理離心，RNA即溶于上層被酚飽和的水相中，向水相加冷乙醇后， RNA即以白色絮狀沉淀析出。此法較好除去DNA和蛋白質，且獲得生物活性的RNA。實驗材料RNA試劑、試劑盒TELi
植物成熟組織觀察實驗（二）
二、薄壁組織1. ?吸收組織取蘿卜根尖制作壓片，置顯微鏡下觀察根毛的形態和結構特點。2. ?貯藏組織取馬鈴薯塊莖一小塊，用雙面刀片進行徒手切片，選取較薄的切片放在載玻片上，加1滴蒸餾水后蓋上蓋玻片置顯微鏡下觀察淀粉貯藏細胞的結構特點。3. ?同化組織取夾竹桃葉片做徒手橫切片，制成臨時切片標本，置顯微
植物學實驗——莖（二）
【目的】掌握雙子葉植物 ?莖的次生結構，了解周皮的發生和組成，掌握單了葉植物莖的結構。 【實驗內容】（一）雙子葉植物莖的次生構造：椴樹莖1，2，3年木槿莖徒手切片（二）周皮的發生和組成天竺葵莖接骨木的皮孔（三）單子葉植物莖的結構小麥玉米莖的次生結構維管形成層的產生：束中形成層：原形成層轉變而成 束
鈣調蛋白的粗分級分離實驗
鈣調蛋白的粗分級分離實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 上清 固體硫酸銨 濃硫酸 Tris
鈣調蛋白的粗分級分離實驗
試劑、試劑盒?上清固體硫酸銨濃硫酸Tris 堿緩沖液 B儀器、耗材?聚丙烯燒杯磁力攪拌器與攪拌子聚碳酸酯離心管超速離心機帶刻度的聚丙烯量筒粗棉布聚丙烯漏斗橡皮淀帚 刮勺透析袋實驗步驟?材料與設備上清，得自實驗 2(約 700~1000 ml)固體硫酸銨聚丙烯燒杯（2x4000-ml)磁力攪拌器與攪拌
鈣調蛋白的粗分級分離實驗
為純化鈣調蛋白，對平滑肌組織提取物的粗分級分離采取了兩步不同的操作：硫酸銨沉淀和等電點沉淀。這兩步操作利用了鈣調蛋白的兩個不同的性質，即它在中性以上 pH 條件下的高溶解度和它的酸性等電點。本實驗來源于蛋白質純化與鑒定實驗指南，作者：朱厚礎。試劑、試劑盒上清固體硫酸銨濃硫酸Tris 堿緩沖液 B儀器
線粒體分離實驗
從組織培養細胞中分離線粒體 從組織中分離線粒體 用蔗糖密度梯度法純化線粒體 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
線粒體分離實驗
實驗材料 細胞試劑、試劑盒 RSBMS 緩沖液儀器、耗材 Dounce 勻漿器實驗步驟 1. 用 11 ml 冰上預冷過的 RSB 重新懸浮細胞，轉移到一個 15 ml 的 Dounce 勻漿器中RSB（使組織培養細胞膨脹的低滲緩沖液）10 mmol/L NaCl2.5 mol/L MgCl210
細胞和亞細胞提取物的制備實驗8
方案8 酵母提取物的制備實驗實驗方法原理由于酵母的經典遺傳分析和分子遺傳分析都已經研究得非常透徹，因而對于純化重組動物蛋白來說，酵母是一個很有吸引力的表達體系。關于培養和收集酵母細胞的討論，尤其是芽殖酵母，參見 Jazwinski(1990)。酵母細胞的裂解方法有很多種，包括自溶、壓力破碎（如 Fr
細胞和亞細胞提取物的制備實驗5
方案5 細菌中重組蛋白的小量提取實驗實驗方法原理利用細菌獲得用于純化的重組蛋白是非常方便的。為了檢測誘導和重組蛋白的表達水平，評估方法的快速簡單是很重要的。本方案使用 0.5% TritonX-1OO 裂解細胞，小量制備細菌提取物。實驗材料表達目標重組蛋白的細菌細胞試劑、試劑盒二硫蘇糖醇（DTT)樣
細胞和亞細胞提取物的制備實驗6
方案6 細菌中重組蛋白的大量提取實驗實驗方法原理利用細菌獲得用于純化的重組蛋白是非常方便的。適用于細菌細胞蛋白提取的方法包括超聲波處理、玻璃珠研磨、釩土或石英砂研磨、French 加壓罐高壓剪切細胞和溶’菌酶處理。這些方法適用于從各種革蘭陰性菌和革蘭陽性菌中制備蛋白提取物。通常是使用酶的方法破壞細胞
細胞和亞細胞提取物的制備實驗7
方案7 從包含體中溶解大腸桿菌重組蛋白實驗實驗方法原理由于分子克隆技術能夠使細菌高水平表達蛋白，因此原核表達是一個非常便利的獲得重組蛋白的系統。遺憾的是這些蛋白在細菌中易于聚合和沉淀，形成難溶解的包含體，因而很難純化。非細菌蛋白的包含體尤其普遍。雖然沒有一種可用于所有蛋白的普適方法，還是有許多策略適
細胞和亞細胞提取物的制備實驗4
方案4 氮艙減壓法裂解培養細胞實驗實驗方法原理通過來自增壓艙中的氮氣減壓膨脹來破碎細胞是一種快速、有效的細胞和組織的勻漿方法，能釋放完整的細胞器和制備細胞膜（Hunter and Commerford，1961)。該方法的原理很簡單：細胞放在一個壓力艙中，在高壓下（約5500kPa，相當于800ps
細胞和亞細胞提取物的制備實驗3
方案3 用于免疫印跡的動物培養細胞、酵母和細菌的裂解實驗實驗方法原理去垢劑裂解細胞法通常用于培養的動物細胞。典型的離子型去垢劑SDS(如2%SDS)能充分地裂解細胞。培養的動物細胞和細菌，如可以使用這種方式裂解。假如實驗所用的抗體識別的抗原決定簇取決于自然空間構象，并對還原環境敏感，那么在裂解緩沖液
細胞和亞細胞提取物的制備實驗9
實驗方法原理差異去垢劑分離法（differential detergent fractionation, DDF) 包括使用一系列含不同去垢劑的 PIPES 緩沖液對細胞進行連續抽提，首先是毛地黃皂苷，其次是 Triton, 最后是 Tween/脫氧膽酸鹽。這些步驟產生 4 種在生化和電泳上相異的組
細胞和亞細胞提取物的制備實驗2
方案2 用于免疫沉淀的培養細胞的裂解實驗實驗方法原理培養的動物細胞一般使用溫和去垢劑來裂解。如果低濃度的去垢劑就能引起細胞的充分裂解（如 l%NP-40 或 l%Triton X-100)，那么這對目標蛋白的影響可能比方案 1 中所討論的勻漿方法更溫和。去垢劑的選擇必須根據免疫沉淀所用的抗體的識別表
植物細胞線粒體DNA的提取
實驗方法原理分離線粒體DNA和葉綠體DNA的原理是基本一致的。本方法首先是分離完整的細胞器,然后從細胞器中提取DNA。要獲得高純度的細胞器DNA,關鍵是要把所要的細胞器與其他亞細胞結構分離開來,這可以通過差速離心或梯度離心來完成。完整的細胞器經裂解后,可以通過CsCl離心或酚-氯仿抽提獲得DNA。在
植物細胞線粒體DNA的提取
實驗方法原理?分離線粒體DNA和葉綠體DNA的原理是基本一致的。本方法首先是分離完整的細胞器,然后從細胞器中提取DNA。要獲得高純度的細胞器DNA,關鍵是要把所要的細胞器與其他亞細胞結構分離開來,這可以通過差速離心或梯度離心來完成。完整的細胞器經裂解后,可以通過CsCl離心或酚-氯仿抽提獲得DNA。
DNA－親和介質的制備實驗（二）
寡核苷酸的連接1) 取 10ul 10X 接頭-激酶緩沖液加入 65ul 水中，將 DNA 震蕩溶解于此溶液。2) 加 20ul 20 mmol/L ATP(pH7.0) 及 5ulT4 DNA 連接酶（30Weiss 單位)，得最終反應體積為 100ul。3) 在室溫下孵育≥2 h。若 AP-1
RNAi實驗原理與制備方法（二）
3.用RNase III 消化長片斷雙鏈RNA制備siRNA其他制備siRNA的方法的缺陷是需要設計和檢驗多個siRNA序列以便找到一個有效的siRNA。而用這種方法——制備一份混合有各種siRNAs “混合雞尾酒” 就可以避免這個缺陷。選擇通常是200—1000堿基的靶mRNA模版，用體外轉錄
線粒體DNA的組成結構
研究人員發明了轉換卵細胞基因材料的方法，用擁有健康線粒體的卵細胞取代攜帶錯誤線粒體DNA的卵細胞。結果是，胚胎會攜帶來自母親和父親的核DNA，以及卵細胞捐獻者的線粒體DNA。mtDNA雖能合成蛋白質，但其種類十分有限。迄今已知，mtDNA編碼的RNA和多肽有：線粒體核糖體中2種rRNA（12S及16
線粒體DNA的組成結構
研究人員發明了轉換卵細胞基因材料的方法，用擁有健康線粒體的卵細胞取代攜帶錯誤線粒體DNA的卵細胞。結果是，胚胎會攜帶來自母親和父親的核DNA，以及卵細胞捐獻者的線粒體DNA。mtDNA雖能合成蛋白質，但其種類十分有限。迄今已知，mtDNA編碼的RNA和多肽有：線粒體核糖體中2種rRNA（12S及16
線粒體的結構與功能
In an attempt to be concise and understandable, introductory level courses and textbooks frequently present concepts that are technically correc