外無細胞體系翻譯病毒mRNA
實驗材料 ATP GTP 質粒 DNA 肌酸磷酸激酶 10%SDS 膠肌酸磷酸激酶 核酸酶 tRNAHeLaS3 細胞 TgSVA 細胞 Lx 細胞來源于表達人脊髓灰質炎病毒受體的 Ltk 細胞 NS20Y 細胞 人肝癌來源的 HepG2 細胞試劑、試劑盒 HEPES-KOH Tris-HCl 等滲溶液 低滲溶液 10X 鹽溶液 裂解溶液 磷酸肌酸 尚鐵血紅素 亞精胺 EGTA DNaseI LiC1 沉淀溶液 TE S10 翻澤混合物 [32S]Met 電泳緩沖液L 2X 上樣緩沖液 凝膠固定液儀器、耗材 高速離心機 Dounce 勻漿器SDS 凝膠電泳裝置實驗步驟 ―、材料與設備(一）細胞1)HeLaS3 細胞在含 5% 新生牛血清 (NCS) 和 0.15%NaHCO3 的 RPMI1640 培養基中于 37℃ 轉瓶培養，每天進行細胞傳代以維持細胞密度為每毫升 2?5X105 個細胞2)TgSVA 細胞來源于表達脊髓灰質炎......閱讀全文
mRNA細胞溶質傳遞的病毒模擬細胞膜涂層納米顆粒的研發
隨著納米技術的飛速發展，納米給藥已成為現代醫療的一個重要發展方向。納米藥物的一大挑戰是細胞攝取藥物后有效的內體逃逸，因為大多數藥物載荷需定位于除內體外的亞細胞結構后發揮活性，而病毒可以通過內吞作用后引發膜融合，由此將其遺傳物質遞送至宿主細胞的胞質中。既往對于甲型流感病毒的研究顯示，病毒表面發現的
可用于mRNA細胞溶質傳遞的病毒模擬細胞膜涂層納米顆粒
隨著納米技術的飛速發展，納米給藥已成為現代醫療的一個重要發展方向。納米藥物的一大挑戰是細胞攝取藥物后有效的內體逃逸，因為大多數藥物載荷需定位于除內體外的亞細胞結構后發揮活性，而病毒可以通過內吞作用后引發膜融合，由此將其遺傳物質遞送至宿主細胞的胞質中。既往對于甲型流感病毒的研究顯示，病毒表面發現的
基于環狀mRNA的TCRT細胞，治療巨細胞病毒感染
CAR-T細胞療法在治療血液腫瘤方面取得了巨大成功，目前已有10種治療B細胞腫瘤與多發性骨髓瘤的CAR-T產品獲得NMPA與FDA批準上市。與CAR-T細胞類似，T細胞受體工程化T細胞（TCR-T）也是一類經工程化改造的T細胞。不同于CAR-T細胞主要識別細胞表面抗原，TCR-T細胞可以靶向細胞
開發新型－－IVTmRNA－遞送平臺，用于潛在蛋白質替代療法
強大的體外轉錄 (IVT)-mRNA 的潛在臨床應用，以恢復有缺陷的蛋白質功能，很大程度上取決于它們通過開發安全有效的傳遞平臺成功的細胞內傳遞和瞬時翻譯。本研究開發了一種創新的(國際ZL申請中)方法，將ivt ?-mrna與蛋白轉導域(PTD)技術相結合，作為一種高效的遞送平臺。 基于 PTD
翻譯全局控制改善外源蛋白質的折疊效率
近日，華南理工大學林影教授和暨南大學張弓教授的團隊在Biotechnology for Biofuels雜志（生物工程類一區）上發表文章，使用翻譯全局控制方法，改善外源蛋白質在畢赤酵母中表達的折疊效率，有效提高活性蛋白質產量。據悉，這是翻譯組調控在真核生物細胞工廠底盤細胞中的首次成功應用，極大地
信使核糖核酸的降解相關介紹
同一細胞內的不同mRNA具有不同的壽命（穩定性）。在細菌細胞中，單個mRNA可以存活數秒至超過一小時，但平均壽命為1至3分鐘，因此，細菌mRNA的穩定性遠低于真核mRNA。哺乳動物細胞mRNA的壽命從幾分鐘到幾天不等。mRNA的穩定性越高，從該mRNA產生的蛋白質越多。 mRNA的有限壽命使細胞
信使RNA的降解
同一細胞內的不同mRNA具有不同的壽命（穩定性）。在細菌細胞中，單個mRNA可以存活數秒至超過一小時，但平均壽命為1至3分鐘，因此，細菌mRNA的穩定性遠低于真核mRNA。哺乳動物細胞mRNA的壽命從幾分鐘到幾天不等。mRNA的穩定性越高，從該mRNA產生的蛋白質越多。 mRNA的有限壽命使細胞能夠
乙肝病毒的－DNA－復制過程
乙肝病毒（HBV）的 DNA 復制過程較為復雜，主要包括以下步驟：吸附和侵入：乙肝病毒通過其表面的蛋白與肝細胞表面的受體結合，然后病毒被攝入肝細胞內。脫殼：病毒進入細胞后，脫去衣殼，釋放出松弛環狀 DNA（rcDNA）。形成共價閉合環狀 DNA（cccDNA）：rcDNA 進入肝細胞核，在細胞酶的作
真核細胞翻譯的調控介紹
值得注意的是，雖然在原核生物細胞內，翻譯的起始過程依然有IF1、IF2、IF3三類因子的參與（真正耗能的步驟是IF2介導的起始tRNA入位和大亞基招募），但原核細胞幾乎沒有以這些蛋白因子為靶點進行的調控模式。在真核細胞內，由于大量翻譯起始因子的參與，大量對于翻譯的調控也是以這些蛋白因子為靶點進行
簡述真核細胞翻譯起始過程
A. 核糖體的前期準備 （1）eIF1，3，5圍繞E位點結合至小亞基，eIF1A圍繞A位點結合至小亞基； （2）eIF2·GTP在胞質中結合Met-tRNA形成三原復合物； （3）三原復合物進一步結合到小亞基復合物（小亞基以及eIF1，1A，3，5）中小亞基P位點上形成43S復合物； B
原核細胞翻譯的調控介紹
在整體上，原核細胞可通過改變核糖體結合位點（RBS）序列或者在RBS鄰域制造二級結構來阻止小亞基和mRNA的結合進而阻止翻譯的起始。一方面由于RBS序列固定，改變其序列將會造成所有mRNA停止翻譯。另一方面由于改變序列并非快速準確的調控方法，針對單個轉錄本，原核細胞傾向于采取以下幾種方式進行調控
EB病毒感染的人外周淋巴細胞－JVM2細胞
EB病毒感染的人外周淋巴細胞 JVM-2細胞?新皮層的發生過程是胚胎發育期神經發生、遷移和分化各個過程精妙調控的結果。新皮層中神經干細胞分化和子代細胞命運決定的分子機制(Molecular Mechanisms)是神經生物學領域目前研究的熱點及難點。該領域的研究主要集中在轉錄因子、微環境結構和信號通
真核生物翻譯的調控（2）
5′端非翻譯區的二極結構影響到調控蛋白與帽結構的接近，阻礙40S前起始復合體的裝配和在mRNA上的掃描，起負調控的作用。但若二極結構位于 AUG的近下游，（最佳距離為14 nt），將會使移動的40亞基停靠在AUG位點，增強起始反應。真核的系列翻譯起始因子可使二極結構解鏈，使翻譯復合體順利通過
通過高等真核生物無細胞提取物分析mRNA的降解實驗
實驗方法原理 細胞的環境、復制周期的狀態和分化狀態的改變會引起一些 mRNA 半衰期的改變。實驗材料 DEPC細胞多聚核糖體RNA底物試劑、試劑盒 乙酸鉀乙酸鎂DTTTris-乙酸組織培養液無菌去離子水磷酸肌酸ATPGTP乙酸鉀精胺RNase 抑制劑儀器、耗材 高溫烤箱勻漿器研杵低速離心機超速離心機
通過高等真核生物無細胞提取物分析mRNA的降解實驗
細胞的環境、復制周期的狀態和分化狀態的改變會引起一些 mRNA 半衰期的改變。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編：鄭曉飛。實驗方法原理細胞的環境、復制周期的狀態和分化狀態的改變會引起一些 mRNA 半衰期的改變。實驗材料DEPC細胞多聚核糖體RNA底物試劑、試劑盒乙酸鉀乙酸鎂DTTTris-乙酸
通過高等真核生物無細胞提取物分析mRNA的降解實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 細胞的環境、復制周期的狀態和分化狀態的改變會引起一些 mRNA 半衰期的改變。 實驗材料 DEPC 細胞
關于單順反子的基本介紹
單順反子（monocistron）：真核生物基因轉錄產物，在一條mRNA中只含有一個翻譯起始點和一個終止點，編碼一個基因片段。 真核生物mRNA（細胞質中的）一般由5'端帽子結構（m7GPPPN）、5'端不翻譯區、翻譯區（編碼區）、3'端不翻譯區和3'端聚腺苷酸
細胞凋亡的mRNA檢測
研究者們發現了很多在細胞凋亡時表達異常的基因，檢測這些特異基因的表達水平也成為檢測細胞凋亡的一種常用方法。據報道，Fas?蛋白結合受體后能誘導癌細胞中的細胞毒性T細胞（cytotoxic T cells）等靶細胞。Bcl-2 和bcl-X （長） 作為抗凋亡（bcl-2 和bcl-X）的調節物，它們
細胞凋亡的mRNA檢測
研究者們發現了很多在細胞凋亡時表達異常的基因，檢測這些特異基因的表達水平也成為檢測細胞凋亡的一種常用方法。據報道，Fas?蛋白結合受體后能誘導癌細胞中的細胞毒性T細胞（cytotoxic T cells）等靶細胞。Bcl-2 和bcl-X （長） 作為抗凋亡（bcl-2 和bcl-X）的調節物，它們
細胞化學詞匯mRNA帽
中文名稱：mRNA帽英文名稱：mRNA cap定 義：信使核糖核酸(mRNA)的5′端帽子結構。真核生物信使核糖核酸(mRNA)的帽結構為7-甲基鳥苷-5′-三磷酸，通過5′-5′方式與mRNA的5′端相連。應用學科：生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）
BioCon－2021聚焦新冠熱點：核酸疫苗與藥物研發
分析測試百科網訊 2021年4月22-23日，BioCon 2021第八屆國際生物藥大會暨生物技術儀器設備與試劑展覽會在上海寶華萬豪酒店盛大開幕。在以“核酸疫苗與藥物研發”為主題的分論壇上，生物醫藥產業大咖紛紛帶來前沿的核酸疫苗研發進展，探討了新冠疫苗的開發工藝和研發流程及現狀，吸引了大批現場參
關于麥胚提取物系統的簡介
麥胚提取物系統：通過碾磨麥胚，用篩子或吹風機初選，分出麥胚，然后再將粗制的麥胚加10 倍體積的緩沖液與砂子共研磨。以23 000g 轉速離心，所得的上清液稱為S23。上清液通過層析將抑制翻譯的內源氨基酸和植物色素等分離出去。提取物用微球菌核酸酶處理以破壞內源mRNA,最大限度降低翻譯背景。將S2
真核細胞蛋白質合成的相關介紹
真核細胞蛋白質合成的起始真核細胞蛋白質合成起始復合物的形成中需要更多的起始因子參與,因此起始過程也更復雜。 ⑴需要特異的起始tRNA即,-tRNAfmet,并且不需要N端甲酰化。已發現的真核起始因子有近10種（eukaryote Initiation factor,eIF） ⑵起始復合物形成
生物物理所等揭示鋅指抗病毒蛋白ZAP抑制mRNA表達新機制
??? 9月28日，EMBO J.在線發表了中科院生物物理研究所高光俠實驗室的最新研究成果，題為Translational repression precedes and is required for ZAP-mediated mRNA decay。該成果揭示了宿主抗病毒蛋白ZAP通過翻譯抑制和
影響桿狀病毒表達系統的表達因素介紹
在桿狀病毒系統中，要獲得蛋白質的有效表達，首先要選擇合適的轉染載體。依據表達的蛋白質屬融合型或非融合型，選擇單啟動子型或多啟動子型。另外目的基因的選擇要注意以下因素： ①該目的基因應不含內含子； ②去除其mRNA 5′端非編碼區的異源序列； ③翻譯啟始密碼子AUG應處于適當的序列之間（如K
桿狀病毒表達系統的影響蛋白質表達的因素
在桿狀病毒系統中，要獲得蛋白質的有效表達，首先要選擇合適的轉染載體。依據表達的蛋白質屬融合型或非融合型，選擇單啟動子型或多啟動子型。另外目的基因的選擇要注意以下因素：①該目的基因應不含內含子；②去除其mRNA 5′端非編碼區的異源序列；③翻譯啟始密碼子AUG應處于適當的序列之間（如Kozak 序列）
影響表達桿狀病毒表達的因素
在桿狀病毒系統中，要獲得蛋白質的有效表達，首先要選擇合適的轉染載體。依據表達的蛋白質屬融合型或非融合型，選擇單啟動子型或多啟動子型。另外目的基因的選擇要注意以下因素：①該目的基因應不含內含子；②去除其mRNA 5′端非編碼區的異源序列；③翻譯啟始密碼子AUG應處于適當的序列之間（如Kozak 序列）
PCBP1基因的結構特點和主要作用
這個無內含子的基因被認為是由一個完全處理過的pcbp-2mrna的反轉錄產生的。這個基因和PCBP-2有副作用（PCBP3和PCBP4），被認為是由于整個基因的重復事件而產生的這個基因編碼的蛋白質似乎是多功能的。它與pcbp-2和hnrnpk一起對應于主要的細胞聚（rc）結合蛋白。它包含三個可能參與
DNA重組（DNA－recombination）技術：外源基因的蛋白表達2
2.包涵體的分離與純化細胞破碎時提取細胞內產物的關鍵。對于細菌的裂解常用的有酶溶法、超聲破碎法、化學滲透法、玻璃珠研磨等。包涵體可通過超聲波、勻漿等常規的方法是菌體破碎后，離心就可得到。密度梯度離心后可得到高純度的包涵體。包涵體一般不溶于水，為了獲得可溶性的蛋白質可加入強蛋白質變性劑后使其溶解。一般
詳細解讀：mRNA帽子結構的生物學功能與應用
信使核糖核酸（mRNA）的5’端帽子結構（Five-prime cap）（m7GpppN）是在 1970 年代被發現的，它的存在賦予了mRNA穩定性并使其能夠有效翻譯。隨著COVID-19在全球肆虐，mRNA治療成為生物醫藥研發領域中的”新星“，我們對mRNA 5’端帽子結構的生物功能及其應用有