高效液相色譜知識(二)
正相色譜法 采用極性固定相(如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相);流動相為相對非極性的疏水性溶劑(烷烴類如正已烷、環已烷),常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調節組分的保留時間。常用于分離中等極性和極性較強的化合物(如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等)。反相色譜法 一般用非極性固定相(如C18、C8);流動相為水或緩沖液,常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調節保留時間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現代液相色譜中應用最為廣泛,據統計,它占整個HPLC應用的80%左右。隨著柱填料的快速發展,反相色譜法的應用范圍逐漸擴大,現已應用于某些無機樣品或易解離樣品的分析。為控制樣品在分析過程的解離,常用緩沖液控制流動相的pH值。但需要注意的是,C18和C8使用的pH值通常為2.5~7.5(2~8),太高的pH值會使硅膠溶解,太低的pH值會使鍵合的烷基脫落。有報告新商品柱可在pH 1.5~10范圍......閱讀全文
高效液相色譜柱的保護與再生(二)
色譜柱再生 對使用時間較長、柱效逐漸下降的色譜柱,可用下述方法進行快速再生,以除去微量不潔雜質在柱頭的聚積。 正相柱:用下述極性強且能互溶的有機溶劑來洗滌色譜柱,每種溶劑每次用30mL清洗,按庚烷、lv仿、乙酸乙酯、丙酮(氨基柱不用)、甲醇、5%甲醇水溶液次序沖洗(洗脫劑的極性依次遞增),最后再
超高效液相色譜相比高效液相色譜有哪些提升
超高效液相色譜(Ultra Performance Liquid Chromatography,UPLC)借助于HPLC(高效液相色譜)的理論及原理,涵蓋了小顆粒填料、非常低系統體積及快速檢測手段等全新技術,增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。 超高效液相色譜法的原理與高效液相色譜法基本
超高效液相色譜相比高效液相色譜有哪些提升
超高效液相色譜(Ultra Performance Liquid Chromatography,UPLC)借助于HPLC(高效液相色譜)的理論及原理,涵蓋了小顆粒填料、非常低系統體積及快速檢測手段等全新技術,增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。 超高效液相色譜法的原理與高效液相色譜法基本
超高效液相色譜相比高效液相色譜有哪些提升
超高效液相色譜(Ultra Performance Liquid Chromatography,UPLC)借助于HPLC(高效液相色譜)的理論及原理,涵蓋了小顆粒填料、非常低系統體積及快速檢測手段等全新技術,增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。 超高效液相色譜法的原理與高效液相色譜法基本
高效液相色譜與超高效液相色譜條件有什么差異
原理是一致的。不同的地方一個是儀器,一個是色譜柱。后者超高效液相色譜,可以縮短檢測時間,節省時間,節省流動相,大大地提高了效率。先說色譜柱,超高效液相色譜柱的粒徑會更小,柱子也更短。如果說樣品流過液相色譜柱的感覺是流過滿是石頭的管路,那么超高效液相色譜柱就是裝滿了沙子的管路。一般液相色譜柱的粒徑是5
通過超高效液相色譜(ACQUITY-UPLC-)提高色譜分...(二)
實際上,科學家們在使用 UPLC ? 時都會因為增加了分離度和較高的色譜波峰間隔而折衷選擇流量,因此方法的穩健性更強。由亞 2 微米顆粒物質獲得的色譜效能增加與 UPLC 要求的較短的色譜柱長度相結合,會產生較尖銳、同時更加集中的波峰,從而簡化了試驗過程,例如在生物分析法中。質譜學會
通過超高效液相色譜(ACQUITY-UPLC-)提高色譜分...(二)
實際上,科學家們在使用 UPLC ? 時都會因為增加了分離度和較高的色譜波峰間隔而折衷選擇流量,因此方法的穩健性更強。由亞 2 微米顆粒物質獲得的色譜效能增加與 UPLC 要求的較短的色譜柱長度相結合,會產生較尖銳、同時更加集中的波峰,從而簡化了試驗過程,例如在生物分析法中。質譜學會已經利用
高效液相色譜流動相選擇
流動相選擇1)由強到弱:一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進行試驗,這樣可以很快地得到分離結果,然后根據出峰情況調整有機溶劑(乙腈或甲醇)的比例。2)三倍規則:每減少10%的有機溶劑(甲醇或乙腈)的量,保留因子約增加3倍,此為三倍規則。這是一個聰明而又省力的辦法。調整的過程中,注意觀察
高效液相色譜流動相選擇
?????? 流動相的性質要求 ?????? 一個理想的液相色譜流動相溶劑應具有低粘度、與檢測器兼容性好、易于得到純品和低毒性等特征。?????? 流動相選擇 ?????? 1:由強到弱:一般先用90%的乙腈(或甲醇)/水(或緩沖溶液)進行試驗,這樣可以很快地得到分離結果,然后根據出峰情況
液相色譜保養知識介紹
1、? 色譜柱長時間不用,存放時,柱內應充滿溶劑,兩端封死(如ACN適于反相色譜柱,正相色譜柱用相應的有機相)2、? 對于手動進樣器,當使用緩沖溶液時,要用水沖洗進樣口,同時搬動進樣閥數次,每次數毫升。3、流動相使用前必須過濾,不要使用多日存放的蒸餾水(易長菌)。4、帶seal-wash的1100,
液相色譜保養知識介紹
1、? 色譜柱長時間不用,存放時,柱內應充滿溶劑,兩端封死(如ACN適于反相色譜柱,正相色譜柱用相應的有機相)2、? 對于手動進樣器,當使用緩沖溶液時,要用水沖洗進樣口,同時搬動進樣閥數次,每次數毫升。3、流動相使用前必須過濾,不要使用多日存放的蒸餾水(易長菌)。4、帶seal-wash的1100,
液相色譜的分類和高效液相色譜用途
制備型加壓液相色譜,按照色譜柱和樣品量的大小,分為:(1)低壓液相色譜;(2)中壓液相色譜;(3)高壓液相色譜;(4)快速色譜。低壓、中壓與高壓液相色譜的壓力范圍之間會存在一定交疊,沒有統一、明確的標準。 1、快速色譜 柱壓通常為2bar(或30psi)左右,對于那些容易分離的簡單混
色譜技術方法高效液相色譜
高效液相色譜 (HPLC)是目前應用最多的色譜分析方法,高效液相色譜系統由流動相儲液體瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成,其整體組成類似于氣相色譜,但是針對其流動相為液體的特點作出很多調整。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩;進樣系統要求進樣便利切換嚴密;由于液體流動相粘度遠遠高于氣體,
高效液相色譜的色譜柱
填料和流動相的組分應按各品種項下的規定,常用的色譜柱填料有硅膠和化學鍵合硅膠。后者以十八烷基硅烷鍵合硅膠最為常用辛基鍵合硅膠次之,氰基或氨基鍵合硅膠也有使用;離子交換填料用于離子交換色譜;凝膠或玻璃微球等,用于分子排阻色譜等。注樣量一般為數微升。除另有規定外,柱溫為室溫,檢測器為紫外吸收檢測器。在用
高效液相色譜串聯質譜和高效液相色譜質譜法的區別
兩個的區別是質譜部分不同,串聯質譜的質譜部分是多級的,而后者是一級的。
分析型高效液相色譜和制備型高效液相色譜的區別
是的,兩者有關也沒關,制備液相一般是中藥用的,差別在于精密度和載樣量上,普通液相接上制備柱就是制備液相
高效液相色譜串聯質譜和高效液相色譜質譜法的區別
兩個的區別是質譜部分不同,串聯質譜的質譜部分是多級的,而后者是一級的。
分享|史上最全面的高效液相色譜基礎知識詳解!
高效液相色譜法(HPLC)是上個世紀七十年代迅速發展起來的一項高效、快速的分析分離技術,是現代分離測試的重要手段。色譜法的分離原理是:溶于流動相(mobile phase)中的各組分經過固定相時,由于與固定相(station phase)發生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強弱不同,在固定相中
高效液相色譜入門基礎知識之高壓輸液泵
高壓輸液泵是液相色譜儀的關鍵部件,其作用是將流動相以穩定的流速或壓力輸送到色譜系統。對于帶在線脫氣裝置的色譜儀,流動相先經過脫氣裝置再輸送到色譜柱。輸液泵的穩定性直接關系到分析結果的重復性和準確性。? ? ?高效液相色譜儀的結構高效液相色譜儀由高壓輸液系統、進樣系統、分離系統、檢測系統、記錄系統
高效液相色譜柱的分類與應用特點(二)
三、高效親水液相色譜柱 高效親水液相色譜是一個介于正相和反相高效液相色譜之間的運作模式。這個模式最早來自NH2色譜柱的糖分析應用。在此之后,逐步在Diol,?硅膠和親水性高分子鍵合相找到了一些有價值的應用。近年來,高效親水液相色譜成為比較流行的色譜的運作模式,?主要是因為親水性化合物有良好的保留和高
高效液相色譜使用步驟
高效液相色譜儀操作步驟如下:1). 過濾流動相,根據需要選擇不同的濾膜.2). 對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。3). 打開hplc工作站(包括計算機軟件和色譜儀),連接好流動相管道,連接檢測系統。4). 進入hplc控制界面主菜單,點擊manual,進入手動菜單。5). 有一段時間沒用
高效液相色譜的類型
1.吸附色譜法(Absorption Chromatography)2.分配色譜法(Partition Chromatography)3.離子色譜法(Ion Chromatography)4.分子排阻色譜法/凝膠色譜法(Size Exclusion Chromatography)5.鍵合相色譜法(b
高效液相色譜的優勢
高效液相色譜(High Pe-rformance Liauid Chromatography,HPLC)的主要優點是:⑴分辯率高于其它色譜法;⑵速度快,十幾分鐘到幾十分鐘可完成;⑶重復性高;⑷高效相色譜柱可反復使用;⑸自動化操作,分析精確度高。根據分離過程中溶質分子與固定相相互作用的差別,高效液相色
高效液相色譜故障排除
注意:在對NH2改性的色譜柱進行再生時,由于NH2可能成銨根離子的形式存在,因此應該在水洗后用0.1M的氨水沖洗,然后再用水沖洗至堿溶液完全流出。 如果簡單的有機溶劑/水的處理不能夠完全洗去硅膠表面吸附的雜質,用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。 色譜柱的維護 1.使用預柱保護分析柱(
高效排阻液相色譜
實驗材料 nrhTNF 試劑、試劑盒 氯化鈉 PB 儀器、耗材
高效液相色譜使用步驟
高效液相色譜儀操作步驟如下:1). 過濾流動相,根據需要選擇不同的濾膜.2). 對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。3). 打開hplc工作站(包括計算機軟件和色譜儀),連接好流動相管道,連接檢測系統。4). 進入hplc控制界面主菜單,點擊manual,進入手動菜單。5). 有一段時間沒用
高效液相色譜使用步驟
高效液相色譜儀操作步驟如下:1). 過濾流動相,根據需要選擇不同的濾膜.2). 對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。3). 打開hplc工作站(包括計算機軟件和色譜儀),連接好流動相管道,連接檢測系統。4). 進入hplc控制界面主菜單,點擊manual,進入手動菜單。5). 有一段時間沒用
高效液相色譜的應用
高效液相色譜儀是用來檢測分析高沸點不易揮發的、受熱不穩定的和分子量大的有機化合物。HPLC成為解決生化分析問題最有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用,流出組分易收集等優點。因而被廣泛應用到生物化學、食品分析、醫藥研究、環境分析、無機分析等各種領域。高效液相色譜儀
高效液相色譜使用步驟
高效液相色譜儀操作步驟如下:1). 過濾流動相,根據需要選擇不同的濾膜.2). 對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。3). 打開hplc工作站(包括計算機軟件和色譜儀),連接好流動相管道,連接檢測系統。4). 進入hplc控制界面主菜單,點擊manual,進入手動菜單。5). 有一段時間沒用
反相高效液相色譜2
方案2 填充 RP-HPLC 毛細管微柱試劑、試劑盒甲醇n-丙醇反相硅膠TFA 乙腈溶劑體系儀器、耗材水浴超聲波儀色譜加樣器層析柱玻璃料末端接口環氧樹脂流動池正向光學掃描檢測器加熱槍加樣器液相色譜柱填充泵微柱聚丙烯離心管聚硅酸鹽管藍寶石切刀信號數據收集裝置硅膠隔膜Teflon接頭UV檢測器實驗步驟一