酶免疫電鏡技術
(一) 原理 酶免疫電鏡技術是利用酶的高效率的催化作用對其底物的反應形成不同的電子密度,借助于電子顯微鏡觀察,證明酶的存在,從而對抗原進行定位。(二)材料與試劑1.PBS液 取NaCl 8.5g,Na2HPO40.85g,KH2PO40.54g,加水至1 000ml即可。2.DAB溶液 取5mgDAB(3、3二氨基聯苯胺)加入10mlTris-HCl緩沖液(0.05mMol/L pH 7.6),加1%H2O20.5ml~1ml。配制時,避光進行,現用現配。在顯色完成沖洗過程中,要保持流水沖洗,防止非特異性物質積于標本上。3.戊二醛固定液 取50ml 0.2Mol/L PBS緩沖液與25%戊二醛按以下比例配制:0.2Mol/LPBS液 50 &n......閱讀全文
免疫酶標技術
免疫酶標技術1)??直接法1.標本固定。2.PBS洗滌2×3分鐘。3.1%?H2O2(或1%?H2O2?甲醇)抑制內源性過氧化物,室溫10~20分鐘。4.正常血清(1:10)孵育,室溫20分鐘。5.滴加酶標記的抗體37℃1小時或4℃過夜。6.PBS洗滌3×3分鐘。7.DAB+H2O2顯色5~10分鐘
免疫酶標技術
實驗方法原理 先將酶與抗體結合形成酶標抗體,然后和相應的抗原反應,使抗原抗體復合物上帶有酶分子,再與酶的底物H2O2—DAB(3’3—二胺荃聯苯胺)發生顯色反應,在顯微鏡下觀察,根據顏色產物檢測相應抗原。實驗材料 抗體試劑、試劑盒 PBSH2O2血清儀器、耗材 顯微鏡實驗步驟 1. ?標本固定;2.
冷凍蝕刻表面標記免疫電鏡技術
冷凍蝕刻表面標記免疫電鏡技術(1)新鮮或固定的細胞進行直接法或間接法免疫標記。(2)PBS(pH7.5)沖洗3min×2,加入1mmol/l MgCl2蒸餾水洗洗3min×3,離心沉集細胞。(3)將細胞團置于小紙板上,入液氮冷卻的Freon中,取出入冷凍蝕刻儀中進行斷裂操作,再于-100℃蝕刻1mi
免疫電鏡術的技術特點
中文名稱免疫電鏡術英文名稱immunoelectron microscopy;IEM定 義一種與免疫化學方法相結合的電鏡法。樣品先作免疫化學染色,再用電鏡觀察。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),方法與技術(二級學科)
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
(一) 原理標記抗體法雖然具有許多優點,但也存在一些難以克服的問題,如標記抗體的分子增大,對細胞膜和組織的穿透力減弱;化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響;結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合,影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素,通過一系統的非標記抗體的免疫學反應,對組織
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
實驗概要本文介紹了非標記抗體免疫電鏡實驗技術的具體操作方法。實驗原理標記抗體法雖然具有許多優點,但也存在一些難以克服的問題,如標記抗體的分子增大,對細胞膜和組織的穿透力減弱;化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響;結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合,影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的
免疫電鏡術的技術特點
中文名稱免疫電鏡術英文名稱immunoelectron microscopy;IEM定 義一種與免疫化學方法相結合的電鏡法。樣品先作免疫化學染色,再用電鏡觀察。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),方法與技術(二級學科)
免疫電鏡技術(immunoelectronmicroscopy)的染色方法
免疫電鏡技術與光鏡免疫細胞化學染色方法的基本原理和試劑準備基本相同,相關內容可參考本書第四章,這里僅介紹免疫電鏡的幾種染色方法,包括包埋前染色、包埋后染色和冰凍超薄切片免疫染色三種。1.包埋前染色 包埋前染色即在進行常規電鏡包埋處理前先行免疫組織化學染色,然后于解剖顯微鏡下將免疫反應陽性部位取出
免疫電鏡術的技術特點
中文名稱免疫電鏡術英文名稱immunoelectron microscopy;IEM定 義一種與免疫化學方法相結合的電鏡法。樣品先作免疫化學染色,再用電鏡觀察。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),方法與技術(二級學科)
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
(一) 原理標記抗體法雖然具有許多優點,但也存在一些難以克服的問題,如標記抗體的分子增大,對細胞膜和組織的穿透力減弱;化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響;結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合,影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素,通過一系統的非標記抗體的免疫學反應,對組織
非標記抗體免疫電鏡實驗技術
實驗概要本文介紹了非標記抗體免疫電鏡實驗技術的具體操作方法。實驗原理標記抗體法雖然具有許多優點,但也存在一些難以克服的問題,如標記抗體的分子增大,對細胞膜和組織的穿透力減弱;化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響;結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合,影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的
免疫酶技術的技術原理
免疫酶技術是將抗原抗體反應的特異性與酶的高效催化作用有機結合的一種方法。它以酶作為標記物,與抗體或抗原聯結,與相應的抗原或抗體作用后,通過底物的顏色反應作抗原抗體的定性和定量,亦可用于組織中抗原或抗體的定位研究,即酶免疫組織化學技術。目前應用最多的免疫酶技術是酶聯免疫吸附實驗(ELISA),它是使抗
免疫酶技術的技術原理
免疫酶技術是將抗原抗體反應的特異性與酶的高效催化作用有機結合的一種方法。它以酶作為標記物,與抗體或抗原聯結,與相應的抗原或抗體作用后,通過底物的顏色反應作抗原抗體的定性和定量,亦可用于組織中抗原或抗體的定位研究,即酶免疫組織化學技術。目前應用最多的免疫酶技術是酶聯免疫吸附實驗(ELISA),它是使抗
免疫酶技術的技術原理
免疫酶技術是將抗原抗體反應的特異性與酶的高效催化作用有機結合的一種方法。它以酶作為標記物,與抗體或抗原聯結,與相應的抗原或抗體作用后,通過底物的顏色反應作抗原抗體的定性和定量,亦可用于組織中抗原或抗體的定位研究,即酶免疫組織化學技術。目前應用最多的免疫酶技術是酶聯免疫吸附實驗(ELISA),它是使抗
免疫標記電鏡技術標本制備的要求
為保持組織的抗原性,固定劑不宜過強。 1.包埋前染色 優點是切片染色前不經過鋨酸固定、脫水及樹脂包埋等過程,抗原未被破壞,易于獲得良好的免疫反應。特別適用于含抗原量較少的組織。 2.包埋后染色 優點是超微結構保存較好,方法簡便,陽性結構有高度的可重復性,能在同一張切片上進行多重免疫染色。
冷凍蝕刻表面標記免疫電鏡技術介紹
(1)新鮮或固定的細胞進行直接法或間接法免疫標記。(2)PBS(pH7.5)沖洗3min×2,加入1mmol/l MgCl2蒸餾水洗洗3min×3,離心沉集細胞。(3)將細胞團置于小紙板上,入液氮冷卻的Freon中,取出入冷凍蝕刻儀中進行斷裂操作,再于-100℃蝕刻1min 。(4)制做斷裂面復型。
免疫電鏡術的技術方法介紹
中文名稱免疫電鏡術英文名稱immunoelectron microscopy;IEM定 義一種與免疫化學方法相結合的電鏡法。樣品先作免疫化學染色,再用電鏡觀察。應用學科生物化學與分子生物學(一級學科),方法與技術(二級學科)
免疫電鏡技術關鍵的幾個問題
免疫電鏡技術關鍵的幾個問題免疫電鏡集電子顯微技術與免疫細胞化學技術于一體,能顯示抗原或抗體在細胞超微結構水平的位置,已成為當今生物醫學領域的一項重要研究手段。由于免疫電鏡制作過程長,操作程序煩鎖,因此,要得到滿意的免疫金染色切片,必須在關鍵環節上給予注意,以下我們就免疫電鏡染色技術中的幾個問題進行探
免疫電鏡技術關鍵的幾個問題
免疫電鏡技術關鍵的幾個問題 免疫電鏡集電子顯微技術與免疫細胞化學技術于一體,能顯示抗原或抗體在細胞超微結構水平的位置,已成為當今生物醫學領域的一項重要研究手段。由于免疫電鏡制作過程長,操作程序煩鎖,因此,要得到滿意的免疫金染色切片,必須在關鍵環節上給予注意,以下我們就免疫電鏡染色技術中的幾
酶免疫技術的概述
酶免疫技術是以酶標記的抗體或抗原為主要試劑的方法,是標記免疫技術的一種。近年來標記免疫技術飛速發展,應用不同標記物,根據不同原理、不同技術建立起來的檢測方法層出不窮,而方法的創建者往往給同類的方法以不同的名稱。因此確知某一方法屬于哪一類型,對該方法的正確理解有著重要意義。本節先敘述各種標記免疫技
什么是免疫酶技術?
免疫酶技術(immunoenzymatic technique)也叫酶免疫測定,是通過酶標記抗體或抗原來檢測抗原或抗體的方法,其應用范圍極廣。顯示方法是用酶的特殊底物來處理反應后的標本,通過酶催化底物的顯色反應來測定抗原或抗體的存在,以酶標作定量或定性分析。標記酶有辣根過氧化物酶(HRP) 和堿性磷
酶免疫技術的概述
酶免疫技術是以酶標記的抗體或抗原為主要試劑的方法,是標記免疫技術的一種。近年來標記免疫技術飛速發展,應用不同標記物,根據不同原理、不同技術建立起來的檢測方法層出不窮,而方法的創建者往往給同類的方法以不同的名稱。因此確知某一方法屬于哪一類型,對該方法的正確理解有著重要意義。本節先敘述各種標記免疫技
免疫酶技術的簡介
免疫酶技術是指在一定的生物反應器內,利用酶的催化作用,進行物質轉化的技術.其應用范圍已遍及工業、醫藥、農業、化學分析、環境保護、能源開發和生命科學理論研究等各個方面。
酶免疫技術的分類
酶免疫技術一般分成酶免疫組化技術和酶免疫測定兩大類。酶免疫組化技術與熒光抗體技術相似,酶標記抗體與組織切片上的抗原起反應,然后與酶底物作用,形成有色沉淀物,可以在普通光學顯微鏡下觀察。如酶作用的產物電子密度發生一定的改變,則可用電子顯微鏡觀察,稱為酶免疫電鏡技術。 酶免疫測定根據抗原抗體反應后
免疫酶技術的方法
ACA(抗心磷脂抗體)主要通過抑制血管內皮細胞合成PGI2,干擾血栓調節素、纖溶酶原激活劑和蛋白質C系統的活性,抑制抗凝血酶III的活化等而致凝血前高凝狀態,與復發性動靜脈血栓形成、反復自然流產及血小板減少癥關系密切。其主要程序為用純心磷脂的無水乙醇溶液包被聚苯乙烯板,封閉后分別于標本孔和對照孔中加
酶免疫技術的分類
酶免疫技術一般分成酶免疫組化技術和酶免疫測定兩大類。酶免疫組化技術與熒光抗體技術相似,酶標記抗體與組織切片上的抗原起反應,然后與酶底物作用,形成有色沉淀物,可以在普通光學顯微鏡下觀察。如酶作用的產物電子密度發生一定的改變,則可用電子顯微鏡觀察,稱為酶免疫電鏡技術。 酶免疫測定根據抗原抗體反應后
酶免疫技術的概述
酶免疫技術是以酶標記的抗體或抗原為主要試劑的方法,是標記免疫技術的一種。近年來標記免疫技術飛速發展,應用不同標記物,根據不同原理、不同技術建立起來的檢測方法層出不窮,而方法的創建者往往給同類的方法以不同的名稱。因此確知某一方法屬于哪一類型,對該方法的正確理解有著重要意義。本節先敘述各種標記免疫技
酶免疫技術的介紹
酶免疫技術是以酶標記的抗體或抗原為主要試劑的方法,是標記免疫技術的一種。近年來標記免疫技術飛速發展,應用不同標記物,根據不同原理、不同技術建立起來的檢測方法層出不窮,而方法的創建者往往給同類的方法以不同的名稱。因此確知某一方法屬于哪一類型,對該方法的正確理解有著重要意義。本節先敘述各種標記免疫技
免疫酶技術應用介紹
免疫酶技術是指在一定的生物反應器內,利用酶的催化作用,進行物質轉化的技術.其應用范圍已遍及工業、醫藥、農業、化學分析、環境保護、能源開發和生命科學理論研究等各個方面。
酶免疫技術中酶和酶作用底物
酶和酶作用底物(一)酶的要求:?一個酶蛋白分子每分鐘可催化10 3 ~10 4 個底物分子轉變成有色產物。用于標記的酶應符合:1.酶的活性要強,催化反應的轉化率高,純度高。2.酶催化底物后產生的產物易于判斷或測量,方法簡單易行、敏感和重復性好。3.作用專一性強 ,酶活性不受樣品中其他成分的影響,受檢