超速離心法純化病毒實驗——差速離心法
實驗方法原理不同大小和比重的粒子在沉降速度上存在差別，沉降速度差別（相差）在一個或幾個數量級的粒子，可用本法分離提取。實驗材料待純化的病毒試劑、試劑盒無儀器、耗材差速離心機實驗步驟將被分離的樣品交替進行低速離心與高速（或超速）離心。差速離心適用于從組織培養液、雞胚尿囊液或經過紅細胞吸附－釋放的病毒懸液中提純病毒。在由感染細胞或組織勻漿中提取病毒時，由于與病毒大小相近的細胞亞單位及碎片的存在，提純效果不理想。以差速離心法分離提純病毒時，經常以低速 (2 000~3 000 r/min, 20~30 min) 及中速(10 000 r/min,20~30 min) 去除較大的宿主細胞碎片、污染的細菌及其它較大的雜質。然后，選擇在 60 min 內能夠沉淀 80% 以上的病毒粒子的較高速度，離心 1~2h使病毒沉淀。注意事項其他差速離心法的優點是能迅速處理大量樣品，故常作為病毒精制的第一個階段，或者用于病毒樣品的濃縮和粗提。......閱讀全文
病毒中和實驗_固定抗血清－稀釋病毒法
實驗材料已知標準的抗病毒血清 (20抗體單位 0. 1 ml)試劑、試劑盒已知陰性血清 (56℃ 30 min 滅活）宿主：敏感細胞、敏感動物、雞胚儀器、耗材細胞培養板水浴鍋細胞培養箱實驗步驟（以細胞培養為例）：①用細胞維持液連續 10倍稀釋病毒分離物10-1~10-8);②取 0. 6ml不同濃度
病毒中和實驗_固定病毒－稀釋抗血清法
中和試驗 (neutralization test)是在體外適當條件下孵育病毒與特異性抗體的混合物，使病毒與抗體相互反應，再將混合物接種到敏感的宿主體內，然后測定殘存的病毒感染力的一種方法。凡是能與病毒結合，并使其失去感染力的抗體稱為中和抗體。因為病毒要依賴于活的宿主系統復制增殖，因此，中和試驗必須
桿狀病毒表達系統的空斑純化法介紹
由于在重組病毒中多角體基因被外源基因所取代，因此形成的子代病毒不含有包含體，為包含體陰性病毒。包含體陰性病毒與包含體陽性病毒(由野生型病毒形成)在平板中形成的空斑形態是不同的。因此，可在光學顯微鏡下，利用這一特征篩選出含外源基因的重組病毒并加以純化[12]。這正是目前使用最普遍的有效方法。 1
慢病毒的濃縮與純化——PEG8000濃縮法
實驗概要本實驗介紹了用PEG-8000濃縮法濃縮與純化慢病毒的操作步驟。主要試劑1. NaCl2. PEG8000主要設備1. 高壓滅菌鍋2. 0.45μm濾頭3. 高速離心機4. 低溫冰箱實驗步驟1. 5X PEG8000 NaCl配制稱取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在2
關于超速離心機的差速離心方法介紹
超速離心機的差速離心方法是選擇不同轉速的離心，分別分離各個不同組分。例如先用低速沉降大顆粒和上清液，在高速離心上清沉降中等顆粒，最后超速離心上清沉降小顆粒。采用逐級提高離心力分離上情液的方法，把不同大小的顆粒分開。 超速離心機的差速離心方法比較簡單，方便。分離的組份沉到管底，因此可以迅速濃縮所
抗體的純化：鹽析法
精制抗體的方法很多。一般采用綜合技術，避免蛋白變性。如分離IgG時，多結合使用鹽析法與離子交換法，以求純化。提取IgM的方法也很多，如應用凝膠過濾與制備電泳法，或離子交換與凝膠過濾等。?一、原理?蛋白質在水溶液中的溶解度是由蛋白質周圍親水基團與水形成水化膜的程度，以及蛋白質分子帶有電荷的情況決定的。
抗體的純化：鹽析法
精制抗體的方法很多。一般采用綜合技術，避免蛋白變性。如分離IgG時，多結合使用鹽析法與離子交換法，以求純化。提取IgM的方法也很多，如應用凝膠過濾與制備電泳法，或離子交換與凝膠過濾等。一、原理蛋白質在水溶液中的溶解度是由蛋白質周圍親水基團與水形成水化膜的程度，以及蛋白質分子帶有電荷的情況決定的。當用
濾膠過濾層析法蛋白質的純化實驗_凝膠過濾層析法
凝膠過濾層析是一項重要的蛋白質純化技術，又稱為大小排阻、凝膠排阻、分子篩或凝膠過濾層析這種方法利用分級分離，而不需要蛋白質的化學結合，這就明顯降低了因不可逆結合所致的蛋白質損失和失活。另外，可利用此法更換蛋白質的緩沖液或降低緩沖液的離子強度。在蛋白質純化操作中何時使用凝膠過濾，還不能一概而論，有時純
核酸親和層析法純化蛋白質實驗
步驟一 偶聯寡核苷酸到溴化氰活化的 Sepharose 4B 步驟二 核酸親和層析 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 DNA 偶聯至溴化氰活化的 Sepharcse 4
質粒DNA的大量提取和純化實驗——堿法
在制作酶譜、測定序列、制備探針等實驗中需要高純度、高濃度的質粒DNA,為此需要大量提取質粒DNA。大量提取的質粒DNA一般需進一步純化,常用柱層析法和氯化絕梯度離心法。實驗材料細菌試劑、試劑盒STE酚 氯仿NaClPEG乙醇儀器、耗材離心管離心機抽干機實驗步驟1、取培養至對數生長后期的含pBS質粒的
核酸親和層析法純化蛋白質實驗
實驗方法原理 DNA 偶聯至溴化氰活化的 Sepharcse 4B 是通過它們本身的堿基實現的。從理論上講，該方法也許干擾最佳結合序列的接近路徑，但是這樣一個簡單的方法一直被廣泛地成功應用。偶聯效率的定量檢測可經 A260 值測定評估，或者更精確地從偶聯介質上水解核酸和進行磷酸鹽測定。實
羥磷灰石層析法純化核心組蛋白實驗
實驗方法原理 實驗材料 精核試劑、試劑盒 HAP 緩沖液BioGel HTP 粉（Bio－Rad）Bio－Rad 蛋白定量系統（可選）儀器、耗材 2 cm×15 cm 柱及附件 Centriprep－10 濃縮器（Amicon； 可選）實驗步驟 1. 用 25 ml HAP 重懸約 2 ml 精核（
蛋白質的純化實驗——膠體過濾法
不同大小的蛋白質分子進入膠體過濾管柱，可依其分子量差異分離；是一種廣泛應用的蛋白質partition色析法 。實驗材料Sephacryl S-300膠體試劑、試劑盒緩沖液buffer A-150儀器、耗材色析管柱鐵夾試管鐵架水平儀收集器濃縮用離心機?濃縮用離心管實驗步驟一、儀器設備色析管柱 （Pha
蛋白質的表達、分離、純化實驗——層析法
蛋白質表達、分離、純化可以：（1）探索和研究基因的功能以及基因表達調控的機理；（2）供作結構與功能的研究；（3）作為催化劑、營養劑等。實驗方法原理攜帶有目標蛋白基因的質粒在大腸桿菌BL21中，在 37℃，IPTG誘導下，超量表達攜帶有6個連續組氨酸殘基的重組氯霉素酰基轉移酶蛋白，該蛋白可用一種通過共
羥磷灰石層析法純化核心組蛋白實驗
實驗材料精核試劑、試劑盒HAP 緩沖液BioGel HTP 粉（Bio－Rad）Bio－Rad 蛋白定量系統（可選）儀器、耗材2 cm×15 cm 柱及附件 Centriprep－10 濃縮器（Amicon； 可選）實驗步驟1. 用 25 ml HAP 重懸約 2 ml 精核（約含有 6 mg DN
染料配基層析法純化蛋白質實驗
染料配基法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 選擇純化特異蛋白質的適宜染料一般是通過反復試驗比較后決定。Cibacron Blue F3GA，作為該領域的先驅染料與煙酰胺腺嘌
振蕩搖床法純化培養少突膠質細胞實驗
實驗方法原理利用少突膠質細胞、星形膠質細胞和小膠質細胞生長存存時間上的差異，以及細胞生長方式、細胞對培養層黏附性不同等特性，用37℃恒溫搖床從培養的混合膠質細胞中分離少突膠質前休細胞，然后再利用差速貼壁的原理用塑料培養皿或培養瓶除去純化后污染的星形膠質細胞以獲得高純度的少突膠質細胞，并在體外誘導分化
醋酸鈉乙醇沉淀法核酸純化實驗
實驗方法原理核酸是多聚陰離子的水溶性化合物，可以與許多1價、2價離子結合形成鹽類，后者在有機溶劑中不溶解也不變性．在較低溫度下形成沉淀．實驗材料待純化樣本試劑、試劑盒醋酸鈉緩沖液無水乙醇70%乙醇實驗步驟實驗試劑：1. 3mol／L醋酸鈉緩沖液，pH5.2：稱取醋酸鈉（NaAC·3H20）408.1
醋酸鈉乙醇沉淀法核酸純化實驗
實驗方法原理 核酸是多聚陰離子的水溶性化合物，可以與許多1價、2價離子結合形成鹽類，后者在有機溶劑中不溶解也不變性．在較低溫度下形成沉淀．實驗材料 待純化樣本試劑、試劑盒 醋酸鈉緩沖液無水乙醇70%乙醇實驗步驟 實驗試劑：1. 3mol／L醋酸鈉緩沖液，pH5.2：稱取醋酸鈉（NaAC·3H20）4
振蕩搖床法純化培養少突膠質細胞實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 利用少突膠質細胞、星形膠質細胞和小膠質細胞生長存存時間上的差異，以及細胞生長方式、細胞對培養層黏附性不同等特性，用37℃恒溫搖床從培養
微生物分離純化實驗——稀釋涂布平板法
實驗方法原理該方法操作簡便，普通用于微生物的分離與純化。其基本原理包括兩方面：1. 選擇適合于待分離微生物的生長條件，如營養、酸堿度、濕度和氧等要求或加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長，而抑制其他微生物生長的環境，從面淘汰一些不需要的微生物。2. 微生物在固體培養基上生長形成的單個菌落可以是由一個
病毒的培養方法實驗——動物接種法
實驗方法原理注意選擇動物種類，年齡。按病毒侵襲部位的不同，選擇適宜的接種途徑，例如腦炎病毒以注射腦內最敏感。接種后經一定潛伏期，動物發病或死亡即進行解剖。根據動物的癥狀表現，器官病理改變，受染臟器組織懸液能在同種動物進行連續傳代，并排除其他微生物污染的可能性等，即可證明有病毒的增殖。實驗材料小白鼠實
微量柱法純化DNA片段
實驗概要目的DNA片段的回收技術是重組DNA中的關鍵技術，回收是指從電泳介質中純化出目的片斷。目前待回收的片斷主要有酶切片斷和各種PCR片斷；回收的介質主要有瓊脂糖和PAGE；回收的方法主要有樹脂回收、微量柱回收、玻璃奶回收、液氮凍凍融回收及透析袋大量回收等，下面分別介紹樹脂、微量柱及液氮凍凍融回收
濾膠過濾層析法蛋白質的純化實驗
凝膠過濾層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 凝膠過濾層析是根據蛋白質分子大小不同而達到分離效果的，凝膠過濾填料中含有大量微孔，只允許緩沖液及小分子量蛋白質通過，而大分子蛋白
濾膠過濾層析法蛋白質的純化實驗
實驗方法原理 凝膠過濾層析是根據蛋白質分子大小不同而達到分離效果的，凝膠過濾填料中含有大量微孔，只允許緩沖液及小分子量蛋白質通過，而大分子蛋白質及一些蛋白復合物則被阻擋在外。因此，高分子量的蛋白質在填料顆粒間隙中流動，比低分于量蛋白更早地被洗脫下來。最大的蛋白質分子最早流出柱子，因為它們在到達柱底前
核酸親和層析法純化蛋白質實驗2
核酸親和層析實驗材料樣品蛋白質試劑、試劑盒平衡緩沖液（Tris-HClKClEDTA）非特異 DNA實驗步驟在上樣品液到核酸親和柱之前，建議首先采用其他的純化方法，如硫酸銨沉淀、離子交換或凝膠過濾層析等富集目的蛋白。這樣可以除去絕大多數的污染物，并減少非特異結合。親和層析柱一般來講是短而粗的，例如長
聚乙二醇沉淀法純化質粒DNA實驗
這種方法最早由 Richaed Treisman ( 英國，倫敦，ICRF) 參照 Lis 的工作而設計。Lis 是最早用聚乙二醇（PEG ) 分離不同大小 DNA 的人。Treisman 法被廣泛用于堿裂解法制備的質粒 DNA 的純化。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理這
mRNA的提取及純化實驗——親和柱層析法
實驗方法原理該方法利用mRNA上的寡聚A可與較聯寡聚T的纖維素柱在高鹽下以堿基配對形式發生親和吸附，而在低鹽下，堿基配對能力破壞，吸附解除，而其他成分的RNA則不具該特性，因此在高鹽下當RNA抽提樣品流經該柱時，mRNA被掛在柱上，而其他RNA則隨高鹽溶液流出；當用低鹽洗脫液洗柱時，mRNA隨洗脫液
離子交換層析法蛋白質的純化實驗
實驗方法原理 可進行離子交換的蛋白質在實驗條件下必須有單一電荷。溶液中單一電荷的蛋白質可被離子交換樹脂上的小離子置換（指與蛋白質末端離子的交換）；固定在樹脂上。通過提高溶液中相反離子濃度或降低蛋白質所帶電荷數等方法可將蛋白質從樹脂上洗脫下來。利用此法，可根據不同蛋白質電荷性質不同而將其分離開來。若已
動物基因組DNA－的分離純化實驗——鹽溶法
本實驗目的是掌握鹽溶法大量制備動物基因組DNA 的基本原理和方法，根據核糖核蛋白與脫氧核糖核蛋白在一定濃度的氯化鈉溶液中的溶解度不同進行分離, 然后用蛋白質變性沉淀劑去除蛋白,使核酸釋放出來, 再利用核酸不溶于乙醇的性質將核酸析出, 達到分離提純的目的。實驗方法原理根據核糖核蛋白與脫氧核糖核蛋白在一