實驗概要
本實驗介紹了SABC法親和素與生物素系統的操作步驟。
實驗原理
SABC法或稱S-P法、LSAB法，它是采用生物素標記的第二抗體與結合有HRP或AKP酶的鏈霉親和素(streptavidin)連接來測定細胞及組織中的抗原。鏈霉親和素是一種從鏈霉菌培養物中提取的蛋白質，相對分子質量60000，不含糖鏈，等電點pI為6.0～6.5。鏈霉親和素同一定濃度的生物素化酶混合后，就能形成鏈霉親和素-酶復合物，這種復合物中至少存在1個尚未被生物素占據的親和素結合位點，可以和各種生物素標記抗體結合。由于采用了改良的親和純化技術和酶標技術，LSAB法敏感性更高、背景更清晰。
實驗步驟
1. 石蠟切片常規脫蠟至水，PBS洗3X3min。
2. IHC的前處理視特異性一抗不同，可采用蛋白酶消化或熱誘導的微波抗原修復(AR)，PBS洗3X3min。
3. 3％過氧化氫孵育10min(可省略)，以阻斷內源性過氧化物酶活性。
4. PBS洗3X3min。
5. 10％非免疫性動物血清孵育10min(可省略)，以減少非特異性背景，無需沖洗，只需吸去多余血清。
6. 滴加適當稀釋的第一抗體，37℃孵育60min或4℃過夜。
7. PBS洗3X3min。
8. 滴加生物素標記的二抗，37℃孵育30～60min。
9. PBS洗3X3min。
10. 滴加過氧化物酶標記的鏈霉親和素，室溫孵育30min。
11. PBS洗3X3min。
12. 0.04％DAB(含0.03％H2O2)顯色5～10min。
13. 復染，脫水，常規樹膠封固，結果觀察。
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