PCRArray常見問題解答

PCR Array FAQ:

1. 任何一臺能夠做QPCR的儀器據能夠做PCRarray嗎？

2. QPCR 儀器都可以進行QPCR array的實驗。

3. 根據儀器采用的96孔或者384孔板，分為以下5種板型（plate format）：

BioTNT PCR array的適用在哪里？

回答：適用現有的通路研究；

適用少樣本或中等樣本，多基因的QPCR 檢測；

在低樣本或中等樣本的情況下，費用和時間遠小于自行建立QPCR實驗；

使用方便，操作簡單，結果穩定性好；

BioTNT PCR array的優點是什么？

 Ct值的平均差異只有0.25個循環；

數據分析方便：專用軟件方便數據統計與分析

從QPCR 得到實驗數據后，如何進行后續的結果分析？需要配套的儀器設備嗎？

回答： 您可以用這個鏈接，http://www.biotnt.com/product/PCR-Array.aspx

點擊分析工具，然后再點擊：分析軟件下載下載后進行分析。不需要特殊的分析儀器。

BioTNT 的PCR array，如果自己使用，需要購買哪些配套產品？

http://www.biotnt.com/product/PCR-Array.aspx

PCR array 產品之外，您應購買以下產品，對PCR array進行配套使用：

PCR array cDNA第一鏈合成試劑盒 A2010B0B03  
Real time 染料PCR PreMIX A2010A0112
建議使用高品質的抽提試劑盒，推薦型號為：

RNase-Free DNase Set (50)，79254 

如果使用其他公司的抽提試劑盒，如Trizol 法抽提試劑盒，能否使用BioTNT的PCR array 產品？

DNA 去除；使用PCR array 產品前，先進行樣本質量的驗證。能夠通過樣本質量驗證的樣本，可以進行PCR array實驗。

如何進行PCR array 實驗前的樣本質量驗證？

PCR array實驗的質量，建議在使用前先進行樣本質量驗證；

定量與質量控制

使用無菌水(RNase-free)稀釋 RNA 樣本，檢測 260  nm 和 280  nm 吸光值，A260/280 應大于 1.8。

使用公式A260× 40 ×稀釋倍數  = XXXXμg/mL 計算 RNA 濃度。

使用瓊脂糖凝膠電泳檢測 RNA 完整性。

建議：RNA 質量測定后，逆轉錄得到CDNA，建議用多個內參基因自行驗證CDNA 質量；

biotnt 的樣本質量驗證引物套裝，可以在進行QPCR 之前對樣本進行驗證(包含內參引物，如human beta actin， GAPDH,  18sRNA等)

基因組DNA污染控制

Array板塊上的GDC(Genomic  DNA  Control)反應孔專為檢測每個樣品進行qPCR反應時可能存在的基因組DNA污染而設置。如果該反應孔的CT值小于35，則表明存在可檢測到的基因組DNA污染，應采取措施予以解決。因此，必須從RNA樣品中去除基因組和其他全部殘余污染物。建議采用Qiagen 柱式抽提過程中加入DNAse去除基因組污染。

PCR array 之前購買BioTNT 樣本質量驗證引物套裝或者單獨的GDC 引物進行基因組DNA 污染控制的質量驗證；驗證結果CT 值如果小于35，則表明存在可檢測到的基因組DNA污染，應采取措施予以解決。

如何進行樣本的調平？

PCR array之前，對樣本需要進行調平。具體調平方式為：  

RNA 含量調平：實驗樣本的RNA 盡量調到同一水平；加入RNA 酶free的水，調整RNA 濃度；

調平后的樣本：通過內參引物進行驗證，根據CT 值，進行二次調平。

BioTNT PCR array定制費用如何？

BioTNT PCR array 提供您的定制，僅比預制產品增加了400元/板的定制費用。您可以把您要檢測的指標給我們，然后把您的儀器型號，以及sample 數量，重復數量提供給我們，我們為您設置相應的PCR array 形式，并核算相應的費用給您。

BioTNT PCR array的定制，方式靈活，1 plate起訂。

http://www.biotnt.com/product/PCR-Array.aspx，點擊定制服務。

如果我沒有QPCR 儀器，BioTNT 能夠提供什么服務？

BioTNT PCR array service。