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    發布時間:2019-07-26 12:04 原文鏈接: PCR拖尾及假陽性的原因及對策

    拖尾

      現象:產物在凝膠上呈Smear狀態。

      原因

      1.模板不純

      2.Buffer不合適

      3.退火溫度偏低

      4.酶量過多

      5.dNTP、Mg2+濃度偏高

      6.循環次數過多

      對策

      1.純化模板

      2.更換Buffer

      3.適當提高退火溫度

      4.適量用酶

      5.適當降低dNTP和鎂離子的濃度

      6.減少循環次數 

    假陽性

      現象:空白對照出現目的擴增產物

      原因

      靶序列或擴增產物的交叉污染

      對策

      1.操作時應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外;

      2.除酶及不能耐高溫的物質外,所有試劑或器材均應高壓消毒。所用離心管

      及加樣槍頭等均應一次性使用。

      3.各種試劑最好先進行分裝,然后低溫貯存


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