拖尾
現象:產物在凝膠上呈Smear狀態。
原因:
1.模板不純
2.Buffer不合適
3.退火溫度偏低
4.酶量過多
5.dNTP、Mg2+濃度偏高
6.循環次數過多
對策:
1.純化模板
2.更換Buffer
3.適當提高退火溫度
4.適量用酶
5.適當降低dNTP和鎂離子的濃度
6.減少循環次數
假陽性
現象:空白對照出現目的擴增產物
原因:
靶序列或擴增產物的交叉污染
對策:
1.操作時應小心輕柔,防止將靶序列吸入加樣槍內或濺出離心管外;
2.除酶及不能耐高溫的物質外,所有試劑或器材均應高壓消毒。所用離心管
及加樣槍頭等均應一次性使用。
3.各種試劑最好先進行分裝,然后低溫貯存