• <option id="immmk"></option>
  • <noscript id="immmk"><kbd id="immmk"></kbd></noscript>

    實驗設計

    針對通過隨機肽庫篩選得到的12肽段(ADGVGDAESRTR),先用Nicoya 公司的OpenSPR 獨有的LSPR技術測定了CP與殼聚糖的結合親和力;以混和肽作為陰性對照(S1),快速動力學參數分析發現CP是殼聚糖很強的特異配體,結合常數為5.27×10-8M(KD)(Figure1A)。獲得的數據為下步實驗設計開啟了重要的第一步,同時通過分子動力學模擬進一步的研究表明,肽有利于與殼聚糖的相互作用。

     


     

    之后在細胞水平評估了肽對真菌的靶向能力,熒光成像顯示,C型隱球菌中FITC標記的CP處理組熒光明顯高于混合肽處理的熒光,并且用游離殼聚糖預孵育可以完全抑制CP與真菌的結合,表明該CP作為靶向配體對新型C型隱球菌起作用。

     

    然后再將CP偶聯到帶有ITZ藥物的NP納米載體上,構建成CP-NPs 及C-CP-NPs (與殼聚糖孵育),之后看Dil標記的NPs對真菌的靶向性,NPs與感染了表達GFP的C隱球菌的raw264.7巨噬細胞孵育,熒光成像發現,CP-NPs與DiI 信號重疊性很好,證實隱球菌鏈表面的超級殼聚糖與肽改造的NPs存在很強的相互作用,這種相互作用可以賦予復雜環境下藥物傳遞系統的靶向性。

     

    接著對比了C-NPs 及C-CP-NPs與NPs 及CP-NPs的細胞滲透效果,發現C-NPs 及C-CP-NPs可以穿過粘液層而NPs 及CP-NPs則停留在細胞表面,并且在腸道中也有很好的滲透效果,并且FERT 實驗顯示C-CP-NPs能在穿過腸道屏障進入循環系統后仍能維持結構的完整性。

     

    進一步對感染C型隱球菌的動物模型,分別注射C-NPS和口服C-CP-NPS,定量影像分析發現,口服C-CP-NPS的小鼠肺部積累了大量ITZ藥物,而注射C-NPs的小鼠肺部ITZ藥物積累量相對比較少,因此,該結果證明口服C-CP-NPS不但能解決吸收阻礙的問題,還能很好的靶向真菌,并且MSI 成像發現,服用C-CP-NPS肺部感染后沒有出現結節,肺部恢復很好,而未處理的小鼠肺部出現大量免疫細胞,肺泡間質增厚,從而突出了殼聚糖及其多肽配體在口服藥物治療中的必要性。

     

    總結

    本研究首先利用Nicoya  OpenSPR 創新LSPR 技術,其操作簡單,結果準確,檢測不受緩沖液折率及溫度變化影響,出結果速度快的特點,快速獲得了CP與殼聚糖糖結合的動力學數據,從而確定了CP是殼聚糖很強的特異配體,為后面的實驗設計提供必不可少的第一手數據,之后將CP與到ITZ藥物納米載體NP偶聯,看其對真菌的靶向性效果,通過一系列的細胞及動物實驗,確定了殼聚糖及其多肽配體在真菌藥物靶向性的高效及必要性,從而為開發口服型靶向抗病原體藥物提供了一個非常有前景的策略,將挽救更多人類!




  • <option id="immmk"></option>
  • <noscript id="immmk"><kbd id="immmk"></kbd></noscript>
    伊人久久大香线蕉综合影院首页