實驗方法原理 用放射性核素標記靶細胞，當靶細胞受到破壞時，放射性核素被釋放出來，通過測定釋放或殘留在未被破壞細胞內的放射性核素放射活性，即可計算和推測殺傷細胞的細胞毒活性。常用的放射性核素有51Cr、3H-Dr、125I-UdR等。本實驗采用51Cr釋放法檢測人NK細胞活性。
實驗材料 靶細胞
試劑、試劑盒 SDS生理鹽水臺盼藍染色液鉻酸鈉
儀器、耗材 細胞培養板離心管平皿
實驗步驟
一、材料準備
1. 靶細胞制備
（1）取傳代培養24~48小時對數生長期的K562，用RPMI-1640培養液洗滌2次，用10%FCS-RPMI-1640培養液調細胞濃度4×106/ml。
（2）0.5 ml K562細胞懸液加3.7~7.4MBq（100~200uCi）51Cr，5%CO2，37度孵育90分鐘，每個15分鐘振搖一次。
（3）RPMI-1640培養液洗滌3次，洗去未標記的游離51Cr。
（4）10%FCS-RPMI-1640培養液調細胞濃度1×105/ml，同時檢測細胞的51Cr標記率，一般要求標記率＞0.1 cpm/cell。
（5）如暫時不用，可放置4度保存12小時。
2. 效應細胞制備：淋巴細胞分層液分離人PBMC，10%FCS-RPMI-1640培養液調細胞濃度1×107/ml
二、操作步驟
1. 加樣：取上述效應細胞和靶細胞各0.1 ml（E：T=100：1）加入96孔培養板內，3復孔。同時設自然釋放對照孔（0.1 ml 靶細胞+0.1 ml 10%FCS-RPMI-1640培養液）和最大釋放孔（0.1ml靶細胞+0.1 ml 2%SDS）。37度，5%CO2孵育4小時。
2. 測定：1000 r/min 離心培養板5分鐘，用微量移液器吸出各孔上清0.1 ml，加于計數管內，用γ計數儀測定放射活性cpm值。
3. 計算：根據下式計算51Cr自然釋放率和NK細胞毒活性
（1）51Cr自然釋放率（%）=（自然釋放孔cpm值）/（最大釋放孔cpm值）×100%
（2）NK細胞毒活性（%）=（試驗孔cpm值-自然釋放對照孔cpm值）/（最大釋放對照孔cpm值-自然釋放對照孔cpm值）×100%
注意事項
1. 靶細胞的質量非常重要，用臺盼藍拒染色法檢測K562靶細胞的存活率應＞95%。標記后的自然釋放率應＜15%。
2. 效靶細胞比率一般選擇50~100：1，其自然殺傷率不再呈對數增加，標本用量過大。
3. 由于放射性核素具有毒性，標記的靶細胞不宜放置過久，與效應細胞作用時間也不宜過長，因隨時間的延長死細胞增多，自然釋放率也隨之增高。