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    (2)BAT中敲除Mettl3對基因表達的影響
    為了研究iBAT發育中的分子機制,作者進行了RNA-seq(云序可提供此服務),分析比較了BKO和正常小鼠的iBAT中基因的表達情況。GO分析表明BKO小鼠iBAT下調基因中富集了與發育、產熱等功能相關基因,而上調基因中富集的多與炎癥、肌肉發育相關。qPCR(云序可提供此服務)驗證到iBAT的標志基因如adiponectin, aP2, Pparg, Glut4 Cebpα在BKO小鼠中大幅降低,另外還有產熱相關基因、線粒體氧化磷酸化相關基因被驗證到下調。而被驗證到的肌肉發育相關基因的上調,指示了METTL3缺失可能導致BAT向及細胞轉化,影響iBAT正常發育。

    BKO小鼠和control小鼠BAT中基因的表達

    BKO小鼠和control小鼠BAT中基因的表達
     

    (3)BAT中敲除Mettl3對m6A修飾的影響
    作者通過m6A-seq(云序可提供此服務)分析比較了敲除Mettl3對iBAT中mRNA的m6A修飾的影響。分析發現Mettl3敲除導致甲基化位點由集中在3’UTR區變為更加分散,大部分轉錄本的甲基化程度降低,甲基化位點motif也有所變化。
     

    BKO小鼠和control小鼠BAT中的m6A修飾

    BKO小鼠和control小鼠BAT中的m6A修飾
     

    聯合RNA-seq(云序可提供此服務),篩選出甲基化程度和表達均下調的iBAT標志基因Pparg,和產熱相關基因Prdm16Ucp1,并通過qPCR和MeRIP-qPCR進行了驗證,熒光素酶實驗(云序可提供以上服務)進一步驗證了METTL3與這3個靶基因的3’UTR區結合,另外也驗證了m6A reader蛋白YTHDF2和YTHDF3也與3個靶基因結合。這些實驗結果暗示METTL3和YTHDF2/3共同作用調節BAT發育。

    METTL3與Pparg,Prdm16和Ucp1結合

    METTL3與Pparg,Prdm16和Ucp1結合
     


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