診狀
可能的原因 | 解 決 方 法 | |
（ 一 ） 保留時間變化 | 1. 柱溫變化 | 柱恒溫 |
2. 等度與梯度間未能充分平衡 | 至少用 10 倍柱體積的流動相平衡柱 | |
3. 緩沖液容量不夠 | 用 >25mmol/L 的緩沖液 | |
4. 柱污染 | 每天沖洗柱 | |
5. 柱內條件變化 | 穩定進樣條件 , 調節流動相 | |
6. 柱快達到壽命 | 采用保護柱 | |
（ 二 ） 保留時間縮短 | 1. 流速增加 | 檢查泵 , 重新設定流速 |
2. 樣品超載 | 降低樣品量 | |
3. 鍵合相流失 | 流動相 PH 值保持在 3~7.5 檢查柱的方向 | |
4. 流動相組成變化 | 防止流動相蒸發或沉淀 | |
5. 溫度增加 | 柱恒溫 | |
（ 三 ） 保留時間延長 | 1. 流速下降 | 管路泄漏 , 更換泵密封圈 , 排除泵內氣泡 |
2. 硅膠柱上活性點變化 | 用流動相改性劑 , 如加三乙胺 , 或采用堿至鈍化柱 | |
3. 鍵合相流失 | 同前 （ 二 ）3 | |
4. 流動相組成變化 | 同前 （ 二 ）4 | |
5. 溫度降低 | 同前 （ 二 ）5 | |
（ 四 ）
出現肩峰或分叉 | 1. 樣品體積過大 | 用流動相配樣 , 總的樣品體積小于第一峰的 15% |
2. 樣品溶劑過強 | 采用較弱的樣品溶劑 | |
3. 柱塌陷或形成短路通道 | 更換色譜柱 , 采用較弱腐蝕性條件 | |
4. 柱內燒結不銹鋼失效 | 更換燒結不銹鋼 , 加在線過濾器 , 過濾樣品 | |
5. 進樣器損壞 | 更換進樣器轉子 | |
（ 五 ） 鬼峰 | 1. 進樣閥殘余峰 | 每次用后用強溶劑清洗閥 , 改進閥和樣品的清洗 |
2. 樣品中未知物 | 處理樣品 | |
3. 柱未平衡 | 重新平衡柱 , 用流動相作樣品溶劑 （ 尤其是離子對色譜 ） | |
4. 三氟乙酸 （TFA） 氧化 （ 肽譜 ） | 每天新配 , 用抗氧化劑 | |
5. 水污染 （ 反相 ） | 通過變化平衡時間檢查水質量,用 HPLC 級的水 | |
（ 六 ）
基線噪聲 | 1. 氣泡 （ 尖銳峰 ） | 流動相脫氣 , 加柱后背壓 |
2. 污染 （ 隨機噪聲 ） | 清洗柱 , 凈化樣品 , 用 HPLC 級試劑 | |
3. 檢測器燈連續噪聲 | 更換氘燈 | |
4. 電干擾 （ 偶然噪聲 ） | 采用穩壓電源 , 檢查干擾的來源 （ 如水浴等 ） | |
5. 檢測器中有氣泡 | 流動相脫氣 , 加柱后背壓 | |
（ 七 ） 峰拖尾 | 1. 柱超載 | 降低樣品量 , 增加柱直徑采用較高容量的固定相 |
2. 峰干擾 | 清潔樣品 , 調整流動相 | |
3. 硅羥基作用 | 加三乙胺 , 用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相 PH 值 , 鈍化樣品 | |
4. 同前 （ 四 ）4 | 同前 （ 四 ）4 | |
5. 同前 （ 四 ）3 | 5. 同前 （ 四 ）3 | |
6. 死體積或柱外體積過大 | 連接點降至最低 , 對所有連接點作合適調整 , 盡可能采用細內徑的連接管 | |
7. 柱效下降 | 用較低腐蝕條件 , 更換柱 , 采用保護柱 | |
（ 八 ） 峰展寬 | 1. 進樣體積過大 | 同 （ 四 ）1 |
2. 在進樣閥中造成峰擴展 | 進樣前后排出氣泡以降低擴散 | |
3. 數據系統采樣速率太慢 | 設定速率應是每峰大于 10 點 | |
4. 檢測器時間常數過大 | 設定時間常數為感興趣第一峰半寬的 10% | |
5. 流動相粘度過高 | 增加柱溫 , 采用低粘度流動相 | |
6. 檢測池體積過大 | 用小體積池 , 卸下熱交換器 | |
7. 保留時間過長 | 等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫 | |
8. 柱外體積過大 | 將連接管徑和連接管長度降至最小 | |
9. 樣品過載 | 進小濃度小體積樣品 |
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