HPLC部分問題解答

1、除了流速外，還有哪些因素能引起壓力改變?

改變流動相組成和溫度;改變柱長、柱內徑和填料粒度;柱突然阻塞壓力升高(正常情況下其它條件不變柱壓都是逐漸升高的)。

2、什么是強溶劑、弱溶劑?

改變流動相的組成或溶劑溶劑強度就可以改變峰容量因子和保留時間。在一定條件下，減少保留時間或縮短分析時間的溶劑為強溶劑，增加保留時間或延長分析時間的溶劑為弱溶劑。

3、怎樣才會使峰位發生重排?

在分析多組分樣品時，僅改變流動相的強度(組成百分比)而不改變其組成，一般僅僅改變所有組分的保留時間，不會發生峰位的重排。

下列條件改變可能發生峰位重排：

流動相中換了強溶劑;pH值的改變;柱填料的改變;柱溫的改變;流動相的組成改變(如，加入離子對試劑三乙基胺等)。

4、除了在線脫氣，常用的實驗室脫氣方式還有哪些?

加熱回流脫氣，脫氣效果最佳，但無法保持;氦脫氣，此方法脫氣效果佳，能除去百分之九十以上的空氣，但氦氣價格太貴，所以用的不多;真空脫氣，效果僅次于氦脫氣，但脫氣過程中容易造成樣品溶液揮發損失;超聲脫氣，只能脫去約百分之三十的空氣，但，在實驗室中最常用。目前還是盡量爭取用在線脫氣，方便且效果好。

5、評價一個色譜柱的最基本指標有那些?

評介一根色譜柱的基本指標是：塔板數、峰不對稱因子、柱壓降、適用范圍和鍵合相濃度以及峰容量。

6、什么是時間常數?

時間常數實際上是響應時間的設定，起著過濾噪音的作用。時間常數太小(太快)可能增加短噪音，時間常數太大(太慢)可能出寬峰、拖尾峰。

7、為什么在實驗過程中有時會出現倒峰?

所用的流動相在檢測波長下有吸收，而進在此波長下沒有吸收或吸收低于流動相的溶液，在流動相中會出現洞穴，通過柱后出現倒峰。

8、什么是次級保留效應?

在良好的色譜分離中，樣品分子是以單一的保留過程被保留，如在反相色譜中，溶質與柱填料的非極性烷基鏈發生疏水性相互作用，但，在以硅膠為基質的填料中，有些樣品組分能與硅醇基團相互作用，脫附的過程很慢，使峰嚴重拖尾，這就是次保留過程。對付次保留效應最有效的方法就是選用封尾更好色譜柱或加入流動相改良劑(也叫掃尾劑)。

9、前延峰的發生及處理?

因柱溫問題很易引起前延峰，有些樣品在常溫下分離可見前延峰，提高溫度后前延峰的現象消失。在離子對色譜中，前延峰的另一個原因是用非流動相作樣品溶劑。因此在離子對色譜中要求僅用流動相溶解樣品，而且進樣量不要太大，否則會導致前延峰或其它問題。在rp-HPLC中樣品溶液的強度大于流動相引起前延峰。增加流動相的強度，減少樣品溶液的強度，在離子對色譜中增加離子強度，可以克服前延峰的效應。此外使用流動相溶解樣品是解決的最簡單實用的方法。