HLA基因分型方法：PCR－SSCP法

PCR－SSCP法

1）提取DNA

同前RFLP法

2）PCR擴增

同前PCR-RFLP，也可加入1μCi³²P-dCTP標記產物。

3）非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳

1．取PCR的擴增產物，加凝膠加樣液3μl，95℃加熱變性2min，冰浴驟冷。同位素摻入的DNA取1μl稀釋10倍，加樣3μl。

2．取樣品用微量加樣器加入非變性聚丙烯酰胺凝膠樣品孔中，200V電泳過夜。

4）放射自顯影

1．未摻入同位素的PCR產物電泳后，取出凝膠床，撬去粘附的玻璃板，將凝膠浸在固定液中15min。

2．用0.2％ AgNO₃浸泡10min，用去離子水沖洗。

3．在顯色液中顯影，直到獲得滿意效果。將顯色好的凝膠轉貼到濾紙上，照相分析結果。