HIV檢測的標準操作程序

【目的】
保證檢測結果準確可靠.
【該SOP 變動程序】
本標準操作程序的變動，可由任一使用本SOP 的工作人員提出，并報經下述人員批準簽字：專業主管、科主任。
【標本的采取和保存】
隨機靜脈血2ml，分離血清備用。也可使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮，無污染，避免無溶血，避免反復凍融，不可用NaN3防腐。
【操作程序】
1．實驗準備：從冷藏環境中取出試劑盒，在室溫下平衡30 分鐘，同時將濃縮洗滌液作1:20 稀釋。
2．加待測標本：加入待測標本每孔100 ul，并設HIV 陽性對照2 孔，HIV 陰性對照2 孔，空白對照1 孔,置37 ℃30分鐘。棄去孔內樣本，扣干。
3．洗 板：
1)手工洗板：棄去反應板條孔內液體拍干；用洗滌液注滿每孔，靜置5—10秒，棄去孔內洗滌液拍干，如此反復5 次，拍干。
2)洗板機洗板：選擇洗滌5 次的程序洗板，最后拍干。
4．加酶結合物：每孔100 ul，空白對照孔不加，充分混勻，置37℃孵育30分鐘，同上法洗反應板5次。
5．加顯色劑：先加顯色劑A，每孔50 ul；再加顯色劑B，每孔50 ul；充分混勻，放置37℃避光孵育15 分鐘。
6．終止反應：每孔加入終止液50 ul，混勻。
7．測定：用酶標儀讀數，可選擇唯波長450nm(以空白孔校零)或雙波長450／630nm，讀取各孔OD 值。
【結果判斷】
1、實驗設計要求陽性對照平均值大于1.20，陰性對照平均小于0.10，陽性、陰性對照OD值之差大于1.20，否則本次實驗無效。
Cutoff 值計算：COV=陰性對照平均OD 值+0.10
標本OD 值>=COV為陽性，標本OD 值<COV為陰性
注：陰性對照OD 值低于0.05 作0.05 計算，高于0.05 按實際OD 值計算。
【注意事項】
1．試劑使用前應搖勻，并棄去1-2 滴后垂直滴加，注意均勻用力。
2．從冷藏環境中取出的試劑盒應置室溫平衡30 分鐘再進行測試，余者應及時封存，置冰箱內貯藏備用。
3．洗板時所用的吸水紙請勿反復使用。
4．不同批號試劑請勿通用。
5．結果判斷須在10 分鐘內完成。
6．封片不能重復使用。
7．用本試劑盒應視為有傳染性物質，請按傳染病實驗室檢查規程操作。