作者：懷化市第二人民醫院 張廷華
HIV抗體檢測分為篩查試驗（包括初篩與復檢）和確證試驗。常見的篩查方法有：1、酶免法（ELISA）；2、化學發光與免疫熒光法；3、快速檢測法（多為金標法）。常見的確證方法包括免疫印跡法（WB）、條帶免疫法、放射免疫沉淀法（RIPA）及免疫熒光法（IFA）等。
目前，國內HIV抗體檢測篩查試驗以酶免法（ELISA）最為常用，檢測的標本可使用血液、唾液、尿液等。在國內，先后出現了四代ELISA檢測試劑，現就四代ELISA檢測試劑比較如下：
第一、二代ELISA檢測試劑
ELISA第一、二代檢測試劑基本相似，僅僅以出現的時間順序分為第一代與第二代，現歸為一類，這兩代檢測試劑出現時間早，原理使用的都是間接法，窗口期長。間接法為檢測抗體最常用的方法，屬非競爭性結合試驗。其原理如下：固相Ag+待檢Ab+酶標Ab結合為Ag-Ab-Ab-E復合物,加入底物后顯色，根據顯色深淺確定檢測抗體含量的多少。間接法由于采用的酶標抗抗體僅針對一類免疫球蛋白分子，通常用的都是抗人IgG，嚴格地講，所測的僅為抗體的IgG類，不涉及IgA和IgM。并且第一、二代檢測試劑包被的固相抗原為病毒裂解產物，此類抗原不純，所以以上幾種原因導致了第一、二代檢測試劑的局限性，為時代所淘汰。
第三代ELISA檢測試劑
ELISA第三代檢測試劑針對第一、二代試劑的不足，進行了改進。第三代采用的是雙抗原夾心法，窗口期短。雙抗原夾心法可檢測各類抗體，包括IgG和IgM，IgM比IgG出現的時間更高，檢測IgM更為有利縮短窗口期，第三代檢測試劑包被的固相抗原比第一、二代試劑包被抗原純化度更高，為人工合成式抗原，因此雙抗原夾心法的靈敏度和特異性高于間接法，縮短了HIV抗體檢測的窗口期，為目前國內臨床檢測最為常用的試劑。雙抗原夾心法原理為：固相Ag+待檢Ab+酶標Ag結合為Ag-Ab-Ag-E復合物,加入底物后顯色，根據顯色深淺確定檢測抗體含量的多少。
第四代ELISA檢測試劑
第四代ELISA檢測試劑為最新進展試劑，采用的為抗原抗體聯合檢測法，可同時檢測血液中的HIV-P24抗原和HIV-1/2抗體，此抗體包含IgG和IgM，抗原抗體聯合檢測試劑中抗體檢測采用雙抗原夾心法，P24抗原檢測采用雙抗體ELISA夾心法，因此HIV檢測窗口期更為縮短。
HIV篩查試驗復檢要求：對于初篩呈現陽性反應的標本，應使用原有試劑與另外一種不同原理（或廠家）的試劑，或另外兩種不同原理或不同廠家的試劑進行復檢試驗。針對第四代檢測試劑需注意的是：若采用第四代檢測試劑進行初篩試驗時，則復檢必須包括一種抗原抗體聯合試劑。如果抗原抗體聯合試劑檢測呈陽性反應，而抗體試劑檢測為陰性反應，則應考慮進行HIV-P24抗原或核酸檢測，必要時要進行隨訪。
我們實驗室遇到一例第四代試劑檢測為陽性，確證試驗WB檢測為陰性的病例，病人對我們醫院的檢測結果提出了嚴重質疑。第四代檢測試劑初篩為陽性時，送CDC確證試驗為陰性，此原因為CDC采用的確證試驗多為WB，而WB檢測的為HIV抗體，而沒有涉及到HIV-P24抗原，所以這種情況也是可能出現的。遇此情況，CDC反應需要定期進行隨訪，隨訪期間可根據需要，檢測病毒核酸或P24抗原作為輔助診斷。
所以，以上情況，各位同仁們一定要注意各自實驗室HIV初篩使用的試劑原理，為第幾代檢測試劑，只有多了解檢測原理，并進行分析，在工作上才不會遇到意外的麻煩。
附：四代HIV抗體ELISA檢測試劑對比表
