實驗方法原理 分子雜交是核酸鏈以堿基配對規則的一種結合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子雜交這一特性來對特定核酸序列進行檢測，必須將雜交鏈中的一條用某種可以檢測的進行標記，這條鏈就稱為核酸探針。因此，核酸探針的制備是分子雜交技術的關鍵。放射性同位素標記是最早采用的也是目前最常用的核酸探針標記方法。
實驗材料 DNA
試劑、試劑盒 EGFR-PCR產物washing bufferDetection bufferTE buffe
儀器、耗材 eppendorf管Tip頭PCR儀 鑷子無粉手套量加樣器
實驗步驟
1. 滅菌去離子水稀釋1 ug DNA至總體積16 ul。
2. DNA熱變性：DNA樣品于PCR儀中100℃變性10 min，后迅速置于碎冰中3 min 以上。
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注意事項
1. 用于標記的DNA模板盡可能純化，以提高標記效率
2. 模板DNA>100 bp。
3. 經DIG標記的探針不能用酚/氯仿抽提純化
4. 根據說明書確定標記效率（標記探針及試劑盒陽性對照DIG標記DNA梯度稀釋，尼龍膜點樣，樣本變性，封閉，雜交，現色定量）。
5. 本法亦可用于單鏈DNA或RNA探針的標記，當標記RNA探針時，需采用逆轉錄酶，收獲產物為標記的單鏈cDNA。
6. 可根據下表標記產物。
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1.標記DNA探針每次標準的反應可標記10ng至3μg線性的DNA，也可標記更大量的DNA，但所有的成分和體積要相應增加。(1)DNA探針熱變性，煮沸10min，迅速冷卻于冰/乙醇中5min以上，待用......
