<p> （針對中國豬藍耳病變異株檢測）</p>
<p> 一，產品簡介</p>
<p> 一步法突變型豬生殖與呼吸綜合癥病毒反轉錄PCR</p>
<p> 檢測臨床樣本和環境樣本</p>
<p> 包括48 個擴增反應所需的試劑48次/盒</p>
<p> 請在使用前通讀操作手冊</p>
<p> 二. 試劑盒組成</p>
<p> ? 25 管 擴增反應試劑球 (Reagent Sphere； 4oC 保存)</p>
<p> ? 2 x 520 μl PRRSV 擴增反應試劑球溶液 (Sphere Diluent； -20oC 保存)</p>
<p> ? 2 x 25 μl 陽性對照 (Positive control； -20oC 保存)</p>
<p> 三，保存條件</p>
<p> 試劑球需置干燥劑中保存在4oC，已融解的試劑球則需保存在零下20oC。其它試劑亦需保存在零下20oC。使用前在冰上溶解各試劑并充分混合，不要旋渦振蕩含酶的擴增反應試劑。</p>
<p> 四. 操作程序</p>
<p> 擴增反應試劑的準備</p>
<p> 1. 計算所需的反應數量 (n)</p>
<p> 2. 需要溶解的試劑球 = 0.5 x n</p>
<p> 3. 每個試劑球需要 40 μl 試劑球溶液</p>
<p> 4. 在冰上溶解試劑，并輕輕扣擊充分混合 (不要旋渦振蕩含酶的試劑)</p>
<p> 反應的準備</p>
<p> 1. 實驗中除從樣本中獲得的RNA 模板外，我們還建議設置陽性和陰性（水）對照</p>
<p> 2. 按照下表準備擴增反應試劑：</p>
<p> 反應組分 每個反應體積</p>
<p> 擴增反應試劑 20 μl</p>
<p> 樣品RNA 5 μl</p>
<p> 總體積 25 μl</p>
<p> 注意:</p>
<p> ? 實驗時 RNA 應放在冰上</p>
<p> ? 陽性對照建議加5 μl 試劑盒提供的陽性對照。</p>
<p> ? 建議PCR 過程中檢測樣本設置重復，以便得到可靠的實驗結果</p>
<p> ? 為了驗證陰性實驗結果不是由于樣本中存有PCR 抑制物而導致PCR 呈陰性反應，我們建議在測試樣本中加1 μl 的陽性對照作為spiking 對照 (spiking control)，同時進行PCR 反應。</p>
<p> PCR 循環:</p>
<p> 1 個循環 42oC 30 分鐘</p>
<p> 95oC 10 分鐘</p>
<p> 40 個循環 95oC 30 秒</p>
<p> 53oC 45 秒</p>
<p> 72oC 30 秒</p>
<p> 五. 實驗數據分析</p>
<p> PCR 的產物需要通過2%瓊脂糖凝膠電泳檢測。野生型PCR 產物的長度為330 b.p.相對于變種型PCR 產物的長度為240 b.p.</p>
<p> Spiking 對照</p>
<p> 陰性的實驗結果有幾個可能性：</p>
<p> 1. 樣本中不存在目的片段；</p>
<p> 2. 樣本中目的片段的量低于檢測值；</p>
<p> 3. 樣本中存有 PCR 抑制物。試劑盒中設計spiking 對照 (spiking control) 是為了確定沒有發生PCR 抑制。</p>
<p> 如果樣本中加了陽性對照以后得出陰性結果，說明樣本中存在PCR 抑制物，那幺此次陰性的實驗結果就不能作為正確的結果，需要重新開始樣本核酸的提取和PCR 擴增。</p>
<p> 北京祥龍環宇生物技術有限公司</p>
<p> 北京市朝陽區朝陽路財滿街財經中心9號樓1單元702室 郵編100025</p>
<p> 電話 010-65567512 傳真010-65563420</p>
<p> 編輯：foodadmin</p>