特點
◎提取RNA純度高，無抑制劑，A260/A280為1.8-2.0；
◎產率高，同樣的樣本量提取的RNA更多。
◎不含苯酚和氯仿等有毒溶劑，安全無毒。
◎對于革蘭氏陰性菌和一般的革蘭氏陽性菌有較好的提取效果。
試劑盒組成
|
組分 |
50次 |
100次 |
|
吸附柱和收集管 |
各50個 |
各100個 |
|
裂解液I |
12 mL |
24mL |
|
裂解液Ⅱ |
12 mL |
24mL |
|
析出液 |
4.5 mL |
9 mL |
|
洗滌液 |
9 mL |
18 mL |
|
洗脫液 |
12mL |
24 mL |
|
消化液 |
1.2 mL |
2.4 mL |
|
說明書 |
1份 |
1份 |
產品介紹
BIOG RNA Bacteria Kit適用于革蘭氏陰性菌和一般的革蘭氏陽性菌。對于細菌壁較厚的革蘭氏陽性菌、真菌、細菌芽孢等須首先破壁處理。BIOG RNA Bacteria Kit采用復合消化液消化菌體中的蛋白質，使細胞RNA更容易釋放出來，因而本試劑盒RNA提取產率較高。BIOG RNA Bacteria Kit采用了最新的離子膜技術并反復優化了裂解液和洗脫液配方，提取得到的RNA純度更高，最大限度地去除了蛋白、脂類等雜質污染，可以直接應用于Northern 雜交、RT-PCR、Real Time RT-PCR、 cDNA 文庫構建、體外翻譯等各種常規分子生物學實驗。
操作步驟：
1.請自行準備：無水乙醇、生理鹽水及無RNA酶的1.5mL離心管。
2.取出析出液和洗滌液，按以下操作：
a) 析出液：4.5mL加入25.5mL無水乙醇；9mL加入51mL無水乙醇。
b) 洗滌液：9mL加入21mL無水乙醇；18mL加入42mL無水乙醇。
c) 配制好的析出液如出現沉淀，可在37℃溶解，搖勻后使用。
3.細菌處理：將收集的細菌5,000 rpm離心3分鐘，棄上清，加入200μL生理鹽水，振蕩混勻，5,000 rpm離心3分鐘，棄上清。
4.a) 對于革蘭氏陰性菌和一般的革蘭氏陽性菌，加入200μL裂解液Ⅰ，懸浮沉淀，37℃放置30分鐘。
b) 對于細菌壁較厚的革蘭氏陽性菌、真菌、細菌芽孢等須首先自行進行破壁處理，處理結束后進行步驟5操作。
5.加入200 μL 裂解液Ⅱ，20μL消化液，充分振蕩混勻， 56℃水浴10 分鐘。
6.加入600μL析出液，輕輕顛倒混勻，如有半透明懸浮物，不影響RNA的提取與后續實驗。
7.將吸附柱放入收集管內，取上述溶液600μL轉入吸附柱內，靜置2 分鐘，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內廢液。
8.將剩余400μL液體轉入上述吸附柱內，重復操作步驟7。
9.將吸附柱放回收集管內，加500μL 洗滌液至吸附柱內，12,000 rpm 4℃離心1 分鐘，棄收集管內廢液。
10.將吸附柱放回收集管內，12,000 rpm 4℃離心2 分鐘，離去殘留的洗滌液。
11.取出吸附柱，放入新的無RNA酶的1.5 mL 離心管內，加入50-200 μL 洗脫液，靜置3分鐘，12,000 rpm 4℃ 離心2分鐘，收集RNA溶液。提取的RNA -70℃保存，或直接用于下一步實驗。
注意事項：
析出液、洗滌液含有刺激性化學物質，操作過程請做好防護措施，避免直接接觸皮膚，防止吸入口鼻。如不慎沾染皮膚或眼睛，請立即用清水或生理鹽水沖洗，必要時請就醫。
細菌量建議不高于107。
裂解液Ⅱ如有白色絮狀物析出屬正常現象，置于37℃水浴中溶解即可。
儲存、運輸和有效期
本試劑盒可常溫運輸，室溫（15-25℃）保存，有效期為12個月，消化液請于-20℃存放，避免反復凍融，裂解液Ⅰ請于4℃保存。
質量控制
本產品經嚴格的質量檢驗證明，無生物污染