BCA蛋白濃度測定試劑盒
產品簡介: BCA 蛋白定量法是一種快速靈敏、穩定可靠的蛋白定量測定方法，其測定
范圍是10－2000ug/ml，是比Lowry 法更優越的專用于檢測總蛋白質含量的產品。BCA
法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響。其在562nm 處有最大的吸收
值，通過與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。
原理: BCA(bicinchonininc acid)與二價銅離子的硫酸銅等其他試劑組成的試劑，混合一
起顯示為蘋果綠色，即BCA 工作試劑。在堿性條件下，BCA 與蛋白質結合時，蛋白質
將Cu2+還原為Cu+，一個Cu+螯合二個BCA 分子，工作試劑由原來的蘋果綠形成紫色復
合物，最大光吸收強度與蛋白質濃度成正比。
試劑盒組成：
BCA01(50ml) BCA02(100 ml)
試劑A: BCA 堿性溶液50ml 100ml
試劑B:硫酸銅溶液1ml 2 ml
試劑C:標準BSA 蛋白（1mg/ml） 1ml 1 ml× 2
1.5ml離心管25個50 個
說明書一份
試劑盒保存：試劑A 和B 在室溫的穩定期至少1 年以上。標準蛋白液保存在－20℃,
短期則4℃保存.
測定方法1：（試管法）
1、配制工作液: 根據標準品和樣品數量，按50 體積試劑A，1 體積試劑B 配制適
量BCA 工作液，充分混勻。注意：BCA 工作液室溫24 小時內穩定。工作液配制的量要與
測定所用的比色杯對應。每個測定要做2-3 個平行反應。本處列舉的比色體系所用的是
0.5ml 的比色杯；如果沒有0.5ml 比色杯，反應體系需要放大到實驗將采用的比色杯準
確讀數所需要的體積。
2、BSA 標準品和樣品的準備：樣品用水或其它不干擾顯色反應的緩沖配置，使待
測定的濃度位于標準曲線的線性部分。每個反應準備3 個平行測定。標準曲線一般5-6
個點即可，根據樣品的估測濃度確定各點的具體濃度。稀釋BSA 時,可以用水或與樣品
一致溶液。如待測定的濃度為200μg/ml 左右，按下表的次序加入BSA 標準品、樣品及
BCA 工作液。
3、取適當體積的標準蛋白（蛋白樣品）以蛋白液：工作液為1：20 的比例混勻，
37℃溫浴30min，冷卻至室溫。
4、將樣品與標準品在562nm 波長下測定吸光度。
1、繪制標準曲線，通過標準曲線計算樣品的濃度。注意: 實際濃度需要乘以樣品的稀
釋倍數。
1 2 3 4 5 6 7 待測樣品
稀釋1
待測樣品
稀釋2
BSA (μl) 0 2.5 5 10 15 20 25
H2O (μl) 25 22.5 20 15 10 5 0 0 0
工作液(μl) 500 500 500 500 500 500 500 500 500
OD562
OD562 平均值
測定方法2：（96孔板）
1、配制BCA 工作液: 根據標準品和樣品數量，按50 體積試劑A，1 體積試劑B 配
制適量BCA 工作液，充分混勻。
2、將蛋白標準品按0, 1, 2, 4, 6，8, 10 微升加到96 孔板的蛋白標準品孔中，加滅
菌雙蒸水補足到10 微升；取10 微升待測樣品加入96 孔板。每個測定要做2-3 個平行.
3、向帶測樣品孔和蛋白標準品孔中加入200 微升BCA
工作液（即樣品與工作液的體積比為1：20）混勻。
4、37℃溫浴30min。冷取至室溫。
5、酶標儀562nm 波長下測定吸光度。
6、制作標準曲線，從標準曲線中求出樣品
濃度。
注意事項：
1、反應顏色的深淺除了與樣品的蛋白質濃度相關外，還與反應的溫度有關。如果樣品
的濃度較高（>50μg/ml），反應溫度一般采用37 度。如果樣品蛋白質的濃度較低
（<50μg），反應的溫度為60℃，該溫度下，色氨酸、酪氨酸和肽鍵得到充分氧化，大
大提高檢測靈敏度。
2、該方法檢測的蛋白質濃度范圍20μg-500μg/ml；當蛋白濃度＜20ug/ml 時，推薦60℃
溫浴，并將蛋白液：工作液的比例調至1：8 進行測定（增強法）可以檢測到5ug/ml。
試劑A 和B 在室溫的穩定期至少1 年以上。標準蛋白液保存在－20℃,短期則4℃保存.