四、B·R·A·H·M·S PCT LIA校準品對于參考物質的溯源性
1、B·R·A·H·M·S標準物質的發展
B·R·A·H·M·S公司開始形成第一代降鈣素原產品時，公司人工合成了第一個自己的降鈣素原的參考物質PTN47。該物質由47個氨基酸組成。確定某一批的PTN 47為準，成為公司的降鈣素原的最高級校準品。并將另一批的PTN47作為公司產品校準品，以最高級校準品為準，通過病人標本比對，確定產品校準品與某批號檢測產品組合下的校準值。與公司該批號產品一起銷售給臨床實驗室。
在使用PTN47為參考標準時，公司考慮到它僅是完整分子的一個多肽。所以，在配制標準液時，按照多肽與完整分子的比率多稱了PTN47，期望給予糾正多肽不長的補償。當時，將PTN-47形成的校準體系，稱為“Urstandard PTN-47”，意即“金標準PTN-47”。
但是，PTN47僅為47個氨基酸的多肽，在參與免疫檢測反應中檢測信號較微弱。為此，以后公司又合成了一個第二個降鈣素原的115個氨基酸多肽，稱為PCT 115參考物質。
由于PCT115參與免疫反應的能力增強，與PTN47校準的檢測產品間的結果有很大的差異。為了確保公司任何一代產品對相同病人樣品檢測降鈣素原結果的一致，也與以往PTN47校準的產品對病人檢測結果的一致，公司均以PTN 47校準的B·R·A·H·M·S PCT LIA為準。
為了確保所有各代產品以后對病人樣品檢測結果的一致。首先必須完成由PTN-47與B·R·A·H·M·S PCT LIA產品的組合，和PCT115與B·R·A·H·M·SPCT LIA產品的組合間，在對病人樣品檢測結果一致下，校正PCT115的“標準”值。也即PCT115不可以自身在免疫檢測中具有的實際檢測值為準，它必須被調整到確保病人檢測結果在這兩組系統中的一致，以PTN-47與B·R·A·H·M·S PCT LIA產品的組合為準的值。
2、完成PTN47與PCT115交換
實際檢測顯示的一組標準稀釋液（即免疫檢測中為形成校準曲線需要的系列標準），在PTN47與PCT115間，在相同的B·R·A·H·M·S PCT LIA產品下的結果比較呈曲線表現。因此，不可應用PTN47所有系列稀釋液閱讀點的直接校準。
為確保臨床檢測結果的一致性，使用Urstandard-PTN47與B·R·A·H·M·S PCT LIA產品2h版本校準的，以標準樣品S3（2 μg/L）為準。依據S3單點結果，計算出Urstandard-PCT115范圍其他標準的系列稀釋液的臨床顯示濃度。以后，公司可以Urstandard-PCT115為準，與B·R·A·H·M·S PCT LIA產品2h版本組合，由PTN47S3為準校正的PCT115，經系列PCT115稀釋液去形成在PCT LIA下的校準曲線，對病人樣品進行檢測。這些病人樣品再次在PTN47與B·R·A·H·M·SPCT LIA組合的比較下，證實與PCT115和B·R·A·H·M·S PCT LIA組合的結果比較，符合公司認可的一致性。這樣，完成了PTN47與PCT115在B·R·A·H·M·SPCT LIA產品中得到了病人結果一致性的轉換。
使用PassingBablok回歸分析PTN47與PCT115在B·R·A·H·M·S PCT LIA產品結合的兩個方法比較，確定偏移。該方法允許在X和Y變量下得到檢測誤差，它沒有假設檢測誤差呈正態分布，PassingBablok對于離群點處理非常穩健。使用Passing-Bablok分析顯示了，對347例相關血清檢測時，與LUMItest PCT 2h-版本在完整的檢測范圍內具有良好的相關（y = 1.01+0.05）。
在不同濃度范圍的有關相關，觀察到相關線為非線性表現（斜率下降和在X上的截距上升）。這是因PCT115的較高免疫反應性，被使用S3的單點校準所致。直至100μg/L PCT濃度，平均偏離在檢測范圍（0~500 μg/L）之內，符合臨床要求。在使用PCT115校準與使用PTN47校準比較時，如果PCT濃度大于100 μg/L，觀察到患者結果偏低（平均約6%）。（見表1）。
表1 使用PCT115代替PTN47校準引入平均差異
PCT濃度 （μg/L） | 平均差異 （%） |
臨床觀察 |
0.5~2 | 3.7 | 可能為全身性感染（敗血癥）。 |
2~20 | 5.1 | 看來是全身性感染（敗血癥），除非你已知為其他原因。 具有嚴重全身性感染（嚴重敗血癥）進展的高度風險。 ＞10μg/L幾乎確認因嚴重細菌敗血癥或膿毒休克，為重要的全身性炎癥響應。嚴重敗血癥或膿毒癥休克6的可能性。 |
20~100 | 3.0 | ＞10μg/L幾乎確認因嚴重細菌敗血癥或膿毒休克，為重要的全身性炎癥響應。嚴重敗血癥或膿毒癥休克6的可能性。 |
100~500 | -6.2 | 嚴重敗血癥和膿毒癥休克。 |
3、校準等級和溯源性流程圖
圖1 B·R·A·H·M·S PCT LIA檢測校準品溯源性等級。
圖示的解釋
這是B·R·A·H·M·S的PCT產品校準“溯源示意”。
1）圖中的右上第一個方塊是，以PTN47為準，與B·R·A·H·M·S PCT LIA產品結合，檢測了一組病人血清樣品，確定了這些血清的PCT檢測結果。
2）圖中左側的第一個方塊是，將PCT115與對B·R·A·H·M·S PCT LIA產品結合，以上述這批病人樣品的檢測結果進行校準，使這個組合檢測得到的這組病人樣品檢測結果，與上述的這組病人樣品在PTN47與B·R·A·H·M·S PCT LIA組合檢測結果一致。實際上是通過方法學比較，調整了PCT 115與B·R·A·H·M·S PCT LIA組合中，PCT115應表達的值。這樣確立了PCT 115成為公司的內部的一級校準品地位。（由于B·R·A·H·M·S提供的資料中，沒有特別注明所有圖示中的PCT 115的區別。因此，需要說明的是，圖左側的最上那個方塊內的PCT 115，是公司指定了某批PCT115，作為公司的內部一級（master）標準。圖示稱為廠商校準品。也即被以后稱為的公司的PCT 115金標準。）
3）按照溯源程序，現在到了右側的的第二塊方塊。方塊中“以B·R·A·H·M·S PCT LIA相對于金標準PCT115（意即被調整了標示值的PCT115）的組合，去測定每個校準品的濃度。”這段話說明了，以后不論哪個產品型號，它們使用的校準品的“顯示”濃度值，都必須在B·R·A·H·M·S PCT LIA與金標準組合下，與任何B·R·A·H·M·S PCT產品型號和產品校準品組合，通過病人標本比對中，去調整產品校準品的值，使之達到兩組系統對病人樣品檢測結果最佳一致。由此確定該校準品在某個B·R·A·H·M·S PCT產品型號某個批號的組合下的定值。形成了左側第二塊內的產品校準品。（同樣需要指出的是，這里說的產品校準品，是公司使用的另一批的PCT115。）
4）圖中右側向下的第三個方塊，是公司的B·R·A·H·M·S PCT LIA的產品，它與左側第二個方塊內的產品校準品一起，提供給終點用戶，即臨床實驗室。臨床實驗室對病人血清或血漿進行檢測，得到樣品的PCT檢測結果。然后，該檢測結果提供給中間最下方，意即為臨床診斷和治療提供PCT信息。
五、確定標準濃度的控制范圍
1、公司內部一級校準品的監視
為了監視公司內部一級校準品的穩定性，要求有一個約兩年的老標準范圍系列樣品（血清）與相應0血清。這些組分必須被儲存于≤-15℃。每兩年對公司內部一級校準品檢查一次，必須對在≤-15℃下儲存的10個標準范圍樣品進行檢測。該檢測做法按下面第2點實施。
2、檢測標準濃度的校準
1）檢測操作
至少在兩天內至少進行10批間檢測，使用以市售的0血清復溶（配置）的檢測樣品，同時檢測內部一級校準品和0-血清的組合、和獨立的（與試劑盒無關）的控制血清。所有樣品在熒光光度計上檢測。可以使用相應的市售組合。
2）按以下順序進行雙份檢測：
（1）公司內部一級校準品（標準和控制品）、以0-血清復溶的樣品；
（2）至少有4個獨立的控制血清（天然混合血清），濃度必須覆蓋完整標準范圍。
3）監視檢測PCT-濃度的要求, 見表2。
表2 檢測中檢測PCT濃度
校準品標示濃度 （μg/L） | 檢測均值 （μg/L） | 相對 標準誤% | |
S1 | 0.08 | ≤0.25 | ≤ 10 |
S2 | 0.5 | 0.400~0.600 | ≤5.0 |
S3 | 2 | 1.70~2.30 | ≤3.3 |
S4 | 20 | 17.0~23.0 | ≤2.3 |
S5 | 200 | 170~230 | ≤2.3 |
S6 | 500 | 425~575 | ≤2.0 |
6、概要和結論
B·R·A·H·M·S PCT LIA的校準歷史覆蓋了廠商的檢測程序、廠商的校準品、廠商的一般檢測程序和廠商的產品校準品。校準品依從了ISO17511的要求。
校準品實際是可溯源的，通過校準品的不間斷鏈，到參考物質PCT115、PTN47標準曲線（2h-版本）的標準樣品3（S3）（2μg/L）。