2014質譜沙龍年末巨獻再掀質譜臨床應用熱潮

　　2014年12月28日，“北京市繼續教育-質譜沙龍2014報告會”在首都醫科大學附屬北京朝陽醫院舉行。本次質譜沙龍活動由首都醫科大學附屬北京朝陽醫院、AB SCIEX公司主辦，北京艾米諾醫學研究有限公司、分析測試百科網、默沙東制藥有限公司協辦。本次沙龍旨在開拓質譜在醫院應用研究的新視野，促進質譜儀在相關醫藥科研工作的應用，吸引了質譜領域的專家學者、一線工作者近100余人參加。會場氣氛熱烈，與會者暢所欲言，受益匪淺。

　　質譜沙龍2014年報告交流會現場

　　北京朝陽醫院藥事部 劉麗宏主任

　　沙龍伊始，來自北京朝陽醫院藥事部的劉麗宏主任上臺致辭。劉主任提到，質譜沙龍從2007年開始，在主辦方的堅持和與會同仁的支持下，已經走進了第八個年頭。在這八年里，質譜沙龍由小到大不斷地成長，并得到了大家親切的愛護。質譜沙龍一直秉承著自由交流、技術共享、促進合作的宗旨，推動質譜在臨床醫學上的發展。雖然質譜技術是一個存在許久的老技術，但是它比起現在新興的技術，更加樸實厚重，得到了許多科學家的熱愛，在這個平臺上也得到了許多新應用，它承載著學者們的思想和行內人士追求事業的夢想，幫助我們解決了疾病的診斷和醫療等諸多問題。最后，劉主任提到，這次的沙龍與之前有所不同，會議請到了全國各地的著名專家，并且設置了專家論壇和青年論壇兩個主題，促進了年輕人的交流。

　　在上午的專家論壇上，來自中國醫學科學院藥物所的再帕爾?阿不力孜研究員，上海徐匯區中心醫院的余琛主任藥師，吉林大學生命科學院的顧景凱教授，北京大學生命科學學院的紀建國教授分別作出報告。

　　中國醫學科學院藥物所 再帕爾?阿不力孜研究員

　　來自中國醫學科學院藥物所的再帕爾?阿不力孜研究員為大家帶來題目為《代謝組學及質譜分子成像新方法與應用進展》的報告。質譜技術是提供物質結構信息的最重要科學儀器之一，離子化技術是質譜儀的關鍵及核心技術，報告中構建了基于RRLC-MS/MS技術的代謝組學高通量分析方法及技術平臺，通過大量藥物臨床試驗得到了諸多成果。一，建立了組合式離子化方式的LC-MS代謝組學分析方法，最大程度地克服例了不同極性代謝物的離子化效率差異及離子歧視現象，可以獲得全面、完整的代謝物信息。二，建立了整體輪廓與靶向代謝組學相結合的分析方法以及定量代謝輪廓分析方法。三，構建了組外驗證模型，并將相關性網絡分析、代謝物的動態行為分析、ROC分析整合到代謝組學中，建立整合式數據處理方法；并推導出疾病發生紊亂的代謝途徑。四，發現一批與食道癌、肺癌、乳腺癌等惡性腫瘤診斷或療效評價密切相關的重要潛在小分子標志物。隨后，阿不力孜研究員又介紹了基于AFAI-MSI的成像（藥物）代謝組學分析新方法，并對AFAI-MSI技術及其成像代謝組學方法進行了展望，他認為AFAI-MSI技術可獲得全面的藥物及其代謝物的體內分布、吸收等信息，可以用于直接發現候選藥物的靶器官、預測抗癌藥物的可能瘤譜。成像代謝組學方法可對藥物的藥理活性及潛在毒性進行直觀、重要的預測以及提示藥物作用機理，有望應用于生物標志物的原位篩查和可視化表征。

　　上海徐匯區中心醫院 余琛主任藥師

　　來自上海徐匯區中心醫院的余琛主任藥師為大家帶來題目為《質譜臨床應用的實踐和探索》的報告。LC-MS/MS是國際公認的生物樣本分析（血藥濃度測定）標準技術，是目前開展藥物臨床藥代動力學和生物利用度研究不可或缺的手段。LC-MS/MS在國內的臨床檢驗領域尚處于起步階段，但是發展迅速，余主任的團隊已經取得了諸多成果。在治療藥物的監測方面，能夠檢測11種臨床常用的抗心律失常藥物。建立了人血清中的31中精神類藥物檢測方法。建立了地高辛、卡馬西平、丙戊酸、苯妥英、茶堿的TDM方法，從2008年起連續6年參加并成功通過了衛生部臨床檢驗中心的全國治療藥物監測EQA。在臨床生物分析中，開發和驗證了128中藥物的生物分析方法，為國內多個I期臨床研究項目提供生物分析服務，開展了11個國家創新藥物的I期臨床研究并已有二個項目通過了WHO的GLP檢查并獲公告。在臨床檢驗研究和常規應用中，在同型半胱氨酸，1,5-脫水葡萄糖醇，25（OH）D2和25（OH）D3，睪酮，肌氨酸、肌酐等都取得了成果。最后，余主任對LC-MS/MS進行了展望，他認為應該繼續開拓LC-MS/MS在臨床特色檢驗方面的應用，縮短臨床研究和應用的轉化過程，盡快地為廣大患者提供國際標準的高科技醫療服務，利用現有的技術優勢，積極探討合作參與臨床檢驗參考方法研究，為我國臨檢標準化做出貢獻。

　　吉林大學生命科學院 顧景凱教授

　　來自吉林大學生命科學院的顧景凱教授為大家帶來《面向轉化醫學的DMPK研究策略與展望》的報告。轉化醫學與藥代動力學是連接基礎科學和臨床應用的橋梁，藥代動力學研究包括多個內容，例如代謝組，蛋白質組，藥用基因組，生物標志物等，顧教授首先對質譜在藥代動力學方面的應用作出報告。在小分子藥物方面，研究團隊通過2D-LC-MS/MS建立了對前列腺素和紫杉醇亞細胞的藥代動力學的研究方法。在蛋白肽類藥物方面，團隊利用LC-Triple TOF/MS完成了胸腺肽和重組胸腺肽在人血漿中的藥代動力學研究。內源性小分子的生物分布方面，團隊利用MALDI成像分析不同分子量的藥物和內源性物質，并利用蛋白質組學完成在藥物靶點發現的應用。PEG化藥物方面，團隊利用LC-Triple TOF/MS對PEG5000和6000完成了定量工作。最后，顧教授提到，納米制劑是腫瘤治療的重要突破口，但目前多數化療藥靜脈注射后，只有不到1%劑量能夠到達腫瘤部位，導致化療副作用大、療效低，而納米制劑通過EPR等納米尺度效應，能使1%-5%的納米制劑蓄積于腫瘤組織中，實現減毒增效目標。因此納米制劑的藥代動力學研究有非常重大的意義，但是由于“藥代行為差”，納米制劑失敗率較高，所以納米制劑的藥代動力學研究面臨著巨大的挑戰，也同樣意味著質譜在轉化醫學的研究上還將大有可為。

　　北京大學生命科學學院 紀建國教授

　　來自北京大學生命科學學院的紀建國教授為大家帶來《蛋白質磷酸化修飾位點的質譜鑒定》的報告。目前，與生命活動相關的蛋白組學問題日益被關注，例如與功能相關的變化蛋白質有哪些，修飾位點與功能有什么關系，組蛋白密碼等等。紀教授在報告中介紹了蛋白質翻譯后修飾，蛋白質磷酸化修飾，重大疾病發生發展過程中的磷酸化修飾等相關內容，提出如何實現磷酸化修飾位點的大規模鑒定與功能分析是最關鍵的科學問題。隨后，紀教授介紹了科研團隊目前的相關工作，在磷酸化多肽的富集方面，團隊利用了化學與生化方法，采用CATSET策略鑒定磷酸化位點，提高了多磷酸化肽鑒定3倍，增加磷酸化肽鑒定率20%，并利用正電荷衍生簡化和簡單的MS/MS譜建立了多太高可信度從頭測序方法。最后，紀教授表示，功能調控網絡的PTM串擾機制也正在研究當中。

　　在下午的青年論壇上，來自中醫科學院西苑醫院的張穎研究員，北大人民醫院藥劑科的趙立波老師，八一兒童醫院遺傳中心的楊堯博士，北京朝陽醫院藥事部的劉洪川老師，北京朝陽醫院藥事部的杜萍博士，北京朝陽醫院藥事部的李鵬飛老師，北京朝陽醫院職業病科的李惠玲老師，AB SCIEX公司的李春波博士分別作出報告。

　　中醫科學院西苑醫院 張穎研究員

　　來自中醫科學院西苑醫院的張穎研究員為大家帶來《復方中藥臨床藥代研究中的多成分體內分析——困難、挑戰和實例》的報告。復方藥代動力學研究對認識中藥的物質基礎、橋接成分和藥理反應、毒副反應機制、了解藥物劑量-反應關系以及臨床用藥方案的制定等非常重要，而復方中藥由于成分多、可獲得的對照品不足、前處理困難等原因在體內分析中存在很大的難點。張穎研究員以通脈顆粒成分的臨床藥代體內分析為為研究實例，以LC-MS/MS建立其體內分析方法的開發與應用向與會者進行了報告，張老師認為，中藥多成分體內分析的解決方案的要點在于前期，分析器，基質提取和成分分離幾個方面，而此類工作對于解決臨床醫藥學等相關問題具有十分重要的意義。

　　北大人民醫院藥劑科 趙立波老師

　　北大人民醫院藥劑科的趙立波老師為大家帶來《血漿樣品預處理環境的ph值對芪類化合物HPLC-MS/MS檢測方法基質效應的影響》的報告。芪類化合物廣泛分布于何首烏、大黃、葡萄等天然產物，具有抗炎、抗氧化、抗癌等諸多藥理活性，1.1類新藥苯烯莫德是從土壤線蟲共生細菌的代謝產物中分離出來的一種芪類化合物，目前用于銀屑病的試驗治療，但是在對其進行藥代動力學研究時中，發現HPLC-MS/MS檢測方法受到強烈的基質效應干擾，于是趙老師提出一種假說，堿性生物樣品的預處理環境可能有利于除去引起基質效應的某些內源性干擾物質。試驗里選取了苯烯莫德、氧化白藜蘆、紫檀芪等8個研究對象，利用Agilent1200型高效液相色譜系統和AB SCIEX QTRAP 5500型三重四級桿線性離子阱雜交質譜儀為實驗儀器進行試驗，通過監測磷脂MRM通道，血漿樣品預處理，基質效應計算等實驗步驟得出結論：在堿性條件下萃取血漿樣品，磷脂類化合物殘存少，對芪類化合物基質效應影響小。

　　八一兒童醫院遺傳中心 楊堯博士

　　八一兒童醫院遺傳中心的楊堯博士為大家帶來《質譜技術在遺傳代謝病篩查診斷中的應用》的報告。遺傳代謝病或稱先天性代謝障礙，其種類繁多，綜合發病率高，對新生嬰兒帶來巨大的危害，因此對于遺產代謝病，一定要早發現，早診斷，早治療。現今醫院的常規檢測手段缺乏特異性，很難對遺傳代謝病進行精確的診斷和篩查，而質譜技術高通量的實現了多種遺傳代謝病的診斷和篩查。楊博士介紹了兩種質譜技術在遺傳代謝病篩查上的應用，一是LC/MS/MC對血的篩查，一滴血液分析可以篩查35余種疾病，二是GC/MS對尿的篩查，一滴尿液分析可以篩查66余種疾病。之后，楊博士對甲基丙二酸血癥、苯丙酮尿癥等已經建立了其分析篩查方法的實例進行了報告，并表示質譜技術在遺傳代謝病的應用將會越來越有意義。

　　北京朝陽醫院藥事部 劉洪川老師

　　北京朝陽醫院藥事部的劉洪川老師為大家帶來《新生兒遺傳代謝病液質復篩標準化的初步探索》的報告。遺傳性代謝病是指由于基因突變引起酶缺陷、細胞膜功能異常或受體缺陷引起的一系列臨床癥狀疾病，對兒童危害巨大。質譜技術可以通過檢測樣品離子的特定質荷比進行定性分析，通過同位素內標進行定量分析，顯著增加了方法的特異性和靈敏度，可同時檢測多種疾病的指標物以提示某一種或多種遺傳代謝病的發生。其步驟分為分析前過程，分析過程，分析后過程，劉老師對新華醫院MSMS共篩查60萬新生兒的結果作出報告，陽性率僅為1/3653，效果十分顯著。

　　北京朝陽醫院藥事部 杜萍博士

　　來自北京朝陽醫院藥事部的杜萍博士為大家帶來題為《多西他賽脂質微球注射液Ⅰ期臨床藥代動力學研究》的報告。杜博士介紹了以往所進行的部分研究工作，主要包括以下幾部分內容。

　　1、建立了UPLC-MS/MS方法測定人血漿中總多西他賽，優化了色譜、質譜和樣品預處理條件；實現了樣本的快速高通量制備，LLOQ為2ng/mL，方法學全部驗證結果滿足生物樣品的定量分析的要求；方法簡便易行、專屬性強、靈敏度高、重現性好，已成功應用于定量測定靜脈輸注多西他賽脂質微球注射液后血漿中總多西他賽的濃度。

　　2、建立了超濾-UPLC-MS/MS方法測定血漿中游離多西他賽，優化了超濾條件，保證血漿蛋白結合率基本一致；方法學全部驗證結果滿足生物樣品的定量分析的要求；LLOQ為0.2ng/mL。超濾所需血漿體積僅為0.45mL，顯著低于文獻報道的體積（1mL），在取樣量少的臨床樣品濃度測定中凸顯優勢；已成功應用于患者血漿中游離多西他賽濃度的測定。

　　3、進行了多西他賽脂質微球注射液的臨床藥代動力學研究。

　　通過以上研究推動紫杉烷類抗腫瘤藥物的二次開發和納米制劑應用臨床的進程，為本產品或后續開發同類產品的臨床試驗設計提供參考。

　　北京朝陽醫院藥事部 李鵬飛老師

　　來自北京朝陽醫院藥事部的李鵬飛老師為大家帶來題為《PFB藥代動力學研究設計》的報告。在復溶并配制成供使用的制劑后，超聲造影劑PFB是一種分布在等腎蔗糖溶液中的氣體微泡（中位直徑在2.4-3.5μm之間）的脂穩定水性混懸液。在大鼠中進行的一項研究顯示，Sonazoid微泡可被肝臟的單核吞噬細胞（Kupffer細胞）攝取，但是不能被間質細胞、星形細胞或內皮細胞攝取，氣體的排泄途徑是呼吸。根據文獻中提供的數據，類似PFB的全氟烴氣體在哺乳動物體內預計不會被代謝。李老師的實驗主要是在進行HV靜脈推注后，獲取血液和呼出氣體中PFB的PK數據，獲取健康志愿者靜脈推注PFB后的安全性數據。

　　北京朝陽醫院職業病科 李惠玲老師

　　來自北京朝陽醫院職業病科的李惠玲老師為大家帶來題為《頂空氣相色譜質譜測定PFB藥物在人體中的殘留》的報告。PFB屬于造影劑的一種，是一種烷烴類的化合物，在人體內主要是以氣體的形式存在的。李老師為大家詳細介紹了采用頂空氣相色譜質譜測定PFB藥物在人體中的殘留試驗所用的儀器、實驗條件、試驗方法與流程以及實驗結果等內容。

　　AB SCIEX公司 李春波博士

　　來自AB SCIEX公司的李春波博士為大家帶來題為《AB SCIEX 新一代蛋白質組學分析平臺》的報告。李博士介紹了AB SCIEX在ASMS 2014上推出了新一代蛋白質組學平臺，這是AB SCIEX公司2014年最新也是最重大的技術創新。該組學平臺由TripleTOF 6600系統、SWATH 2.0采集技術、ProteinPilot 5.0軟件及Eksigent nanoLC 400系統組成，從硬件到軟件到工作流程都進行了改進和提升。研究人員每次實驗都可以監測到所有的多肽和蛋白質，而且每個樣本中蛋白質的覆蓋度非常好，一次實驗可以覆蓋幾千個蛋白質的定量，同時數據的重復性好，定量的結果也非常準確。該平臺跟傳統的蛋白質定量的最高標準MRM定量相比，此實驗可獲得所有蛋白質的定量信息，得到非常優異的定量結果。

　　參會人員合影