鼠肝質膜蛋白質組研究的方法評估

摘要 細胞質膜是細胞中重要的細胞器, 在肝功能的發揮中具有非常重要的作用. 使用蔗糖密度梯度離心純化細胞質膜, 通過電子顯微鏡觀察和免疫印跡法檢驗膜的純度. 結果顯示, 與組織勻漿成分相比, 質膜富集了20 倍, 線粒體的污染減少了約50%. 提取的蛋白質用二/一維凝膠電泳(2DE/1DE)分離、胰酶酶解、電噴霧四極桿飛行時間質譜(ESI-Q-TOF)和基質輔助激光解吸飛行時間串聯質譜(MALDI-TOF-TOF)鑒定, 或者提取的蛋白質直接進行溶液內酶解、液相色譜串聯電噴霧離子阱質譜(LC-LTQ)(鳥槍法)鑒定. 一共鑒定了547 個非冗余蛋白質, 其中34%為質膜或質膜相關蛋白質. 優化和評估了質膜蛋白質組研究的方法, 且對鼠肝質膜蛋白質組進行了系統的分析.