摘 要:采用高速逆流色譜法分離純化丹參水溶性成分丹酚酸類物質,制備丹酚酸B 化學對照品。分離采用的溶劑系統為正己烷2乙酸乙酯2水2甲醇(1. 5 :5 :5 :1. 5) ,上相做固定相,下相做流動相,流速為1. 7 mL/ min ,儀器轉速850 rpm ,進樣量80 mg ,純度用HPLC 方法測定。結果表明:一次分離可制備63. 4 mg 丹酚酸B ,其純度為9816 %。該方法操作簡單,可作為高純度丹酚酸B 化學對照品的制備分離方法。
丹參為唇形科植物Salvia miltiorrhiza Bge. 的干燥根及根莖,具有祛淤止痛、活血通經、清心除煩之功效[1 ] 。丹參主要含兩類有效成分;一為脂溶性的二萜類化合物,二為水溶性的多聚酚酸類成分。實驗研究證明,丹參水溶性成分具有多方面的藥理活性,特別是表現出很強的抗氧化活性,這些藥理作用吸引著研究人員開發出一批具有較高水平的藥物應用于臨床[2-3 ] 。丹酚酸B 為丹參中重要的水溶性有效成分之一,由三分子丹參素與一分子咖啡酸縮合而成,在2005 版中國藥典中,已將丹酚酸B 作為丹參片的指標成分[1 ] 。據報道,丹酚酸B 有強烈的抗氧化和清除氧自由基的活性,其抗脂質過氧化作用約為維生素E 的1000 倍,對腎功能不全和肝損傷均有一定保護作用[4 ] 。分離制備丹參水溶性活性成分對進一步揭示丹參藥效的物質基礎和開發新的天然藥物具有十分重要的意義。
高速逆流色譜(High2speed Counter2current Chromatography ,HSCCC) 是近幾十年來迅速發展的新型液-液分配色譜技術,其特點是被分離物質在兩液相中進行分配分離,不需任何固相裁體,克服了固相載體帶來的樣品吸附、損失、污染、峰形拖尾等缺點,樣品的回收率高,預處理簡單[5 ] ,已被廣泛應用于天然藥物成分的分離制備和中藥的分析鑒定中[6-9 ] 。目前,高效逆流色譜法分離純化丹參脂溶性成分的研究已有文獻報道[10-13 ] ,而丹參水溶性有效成分的高效逆流色譜法分離純化國內還未見報道。本文采用HSCCC 分離、純化、制備中藥丹參的水溶性活性成分丹酚酸B ,為制備丹參水溶性有效成分的化學對照品提供了一種簡捷實用的新方法。