實驗材料 乳腺瘤組織
試劑、試劑盒 EDTA異丙醇裂解緩沖液細胞核裂解緩沖液Triton 裂解緩沖液
儀器、耗材 水浴鍋破璃棒
實驗步驟
一、材料
1. 緩沖液、溶液和試劑
EDTA，100 mmol/L
異丙醇
裂解緩沖液
10 mmol/LTris-HCl
1mmol/LEDTA
150 mmol/LNaCl
0.5%SDS,pH10.5
NaCl，0.15mol/L 和 6mol/L
細胞核裂解緩沖液
75 mmol/LNaCl
24 mmol/LEDTA,pH8.0
蛋白酶 K 或者鏈霉蛋白酶，20 mg/ml。
SDS,200 g/L
蔗糖，lmol/L
Tris-HCl,2mol/L,pH9.2
Triton 裂解緩沖液
10mmol/LTris-HCl
5 mmol/L,MgCl2
1%TritonX-100
TE 緩沖液（lOmmol/LTris-HCl,lmmol/LEDTA,pH7.5)
蔗糖，pH9.2
TritonX-100
2. 專用設備
水浴，預熱到 55°C
破璃棒
3. 細胞和組織
處理過的乳腺瘤組織（100 mg 組織用于激素受體分析）或者用 PBS 洗過 2 次的 5X105培養細胞。
二、方法
1. 向盛有細胞的 l0 ml 管中，加入 750ul 裂解緩沖液和 200ug 蛋白酶 K(或者鏈霉蛋酶);55°C 保溫至少 90 min, 直到沉淀溶解。
2. 如果沉淀不容解，重復步驟 1。
3. 加入 250ul 6mol/LNaCl, 小心地搖動。
4.4°C 離心（3000r/min)15 min。小心將上清液轉移到另一新管中。
5. 重復步驟 3 和 4。
6. 加入等體積的異丙醇，顛倒離心管直到看見 DNA。將 DNA 纏繞到玻璃棒上，沿管壁輕輕地將 DNA 拉出，將其轉移到 300ul 的 TE 或者滅菌雙蒸水中。
7. 放于 4°C，使其溶解。
從 10 ml 血液中提取 DNA
8. 加入 40 ml 預冷的（4°C)Triton 裂解緩沖液。
9.4°C 放置 30 min; 每隔幾分鐘將管子翻轉一下。
10.4°C 離心（3000r/min)30 min，棄上清液。
11. 用 5~15 ml0.9%(0.15mol/L) 的 NaCl 洗沉淀（細胞核）。
12.2300r/min 離心 10min。
13. 棄上清液。細胞核可以保存在-20°C。
14. 加入 3 ml 細胞核裂解緩沖液，搖勻。
15. 加入 25ul 鏈霉蛋白酶（20 mg/ml) 和 230ul10%SDS，室溫振搖過夜。
16. 加入 1ml6mol/L 的 NaCl，搖勾。
17.4°C 離心（3000r/min)15 min，小心將上清液轉移到另一新管中。
18. 重復步驟 10。
19. 加入等體積的異丙醇，上下顛倒離心管直到看見 DNA。將 DNA 纏繞到玻璃棒上，沿著管壁輕輕地將 DNA 拉出，將其轉移到 400ul 的 TE 或者滅菌雙蒸水中。
20. 放于 4°C, 使其溶解。