高效液相色譜儀基于經典氣相色譜的理論和方法

高效液相色譜儀的發展是由于氣相色譜對高沸點有機物分析的局限性，為了分離蛋白質、核酸等不易氣化的大分子物質，氣相色譜的理論和方法被重新引入經典高效液相色譜儀。1960年代末科克蘭（Kirkland）、哈伯、荷瓦斯(Horvath)、莆黑斯、里普斯克等人開發了世界上第一臺高效液相色譜儀，開啟了高效液相色譜儀的時代。高效液相色譜儀使用粒徑更細的固定相填充色譜柱，提高色譜柱的塔板數，以高壓驅動流動相，使得經典高效液相色譜儀需要數日乃至數月完成的分離工作得以在幾個小時甚至幾十分鐘內完成。

　　高效液相色譜儀的系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相) 內， 高效液相色譜儀由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數， 在兩相中作相對運動時， 經過反復多次的吸附- 解吸的分配過程， 各組分在移動速度上產生較大的差別， 被分離成單個組分依次從柱內流出， 通過檢測器時， 樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來。

　　高效液相色譜儀是目前應用最多的色譜分析方法，高效液相色譜儀系統由流動相儲液體瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是針對其流動相為液體的特點作出很多調整。HPLC的輸液泵要求輸液量恒定平穩；進樣系統要求進樣便利切換嚴密；由于液體流動相粘度遠遠高于氣體，為了減低柱壓高效液相色譜的色譜柱一般比較粗，長度也遠小于氣相色譜柱。HPLC應用非常廣泛，幾乎遍及定量定性分析的各個領域。

　 　使用高效液相色譜儀時，液體待檢測物被注入色譜柱，通過壓力在固定相中移動，由于被測物種不同物質與固定相的相互作用不同，不同的物質順序離開色譜柱， 高效液相色譜儀通過檢測器得到不同的峰信號，最后通過分析比對這些信號來判斷待側物所含有的物質。高效液相色譜作為一種重要的分析方法，廣泛的應用于化學 和生化分析中。高效液相色譜從原理上與經典的液相色譜沒有本質的差別，高效液相色譜儀的特點是采用了高壓輸液泵、高靈敏度檢測器和高效微粒固定相，高效液 相色譜儀適于分析高沸點不易揮發、分子量大、不同極性的有機化合物。