本文采用Rigol Compass C18、Rigol Compass C18 （2）和Agilent Poroshell 120 EC C18三種色譜柱分離測定紅參中的人參皂苷Rg1、Re和Rb1。方法準確、重復性好，均可達到藥典要求。
紅參的主要活性成分包括人參皂苷Rg1、Re和Rb1，常規分析主要用HPLC-UV法、HPLC-ELSD法，多使用250mm×4.6mm×5μm或150mm×4.6mm×5μm色譜柱。本文采用Rigol Compass C18 、Rigol Compass C18(2) (及Agilent Poroshell 120 EC C18 三種色譜柱對紅參進行分離。
實驗方法
儀器與試藥
RIGOL L-3000液相色譜儀，電子天平，超聲波清洗儀。人參皂苷Rg1，人參皂苷Re，人參皂苷Rb1，紅參，乙腈，甲醇，超純水，正丁醇，三氯甲烷。
對照品及供試品溶液制備
精密稱取10.1mg人參皂苷Rg1、9.9mg人參皂苷Re、10.3mg人參皂苷Rb1至10ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容。取紅參粉末1.001g，置索氏提取器中，加三氯甲烷100ml，加熱回流3h，藥渣揮干溶劑，移入錐形瓶中，精密量取水飽和正丁醇50ml，密塞，超聲提取30min濾過，棄初濾液，精密量取續濾液25ml蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉移至5ml量瓶，加甲醇稀釋至刻度，用0.22μm濾膜過濾。
結果與討論
常規色譜柱測試結果
采用常規色譜柱分析條件的方法1、2對紅參樣品進行測試分析（色譜圖見圖1、測試結果見表3），通過人參皂苷Rg1、Re和Rb1對照品溶液，確定1#為人參皂苷Rg1，2#為人參皂苷Re，3#為人參皂苷Rb1。結果顯示：理論塔板數以人參皂苷Rg1峰計，均大于9000，人參皂苷Rg1與人參皂苷Re的分離度均大于2.2。
采用Rigol Compass C18、Rigol Compass C18（2）色譜柱進行紅參中人參皂苷的分離，可達到中國藥典的要求。
快速色譜柱測試結果
新型的表面多孔顆粒高效液相色譜柱能在高效液相色譜的壓力范圍內實現高效率、高分離度的快速分析。本文中使用的Poroshell 120色譜柱由2.7μm顆粒填充，可實現相當于亞2μm顆粒填充色譜柱80%~90%的性能，反壓卻低將近50%。
根據公式1計算從150mm×4.6mm×5μm常規色譜柱轉換成100mm×4.6mm×2.7μm色譜柱后的梯度洗脫時間。根據方法3進行紅參中的人參皂苷Rg1、Re和Rb1分離（色譜圖見圖2、測試結果見表4），人參皂苷Rg1、Re的分離度達2.679，理論塔板數以人參皂苷Rg1峰計為14385，系統壓力最大值為207bar，分析時間可由原來的100min減少至67min。
公式1，其中：Timecol.i：梯度洗脫時間（i=1、2）；Volumecol.i：色譜柱柱體積（i=1、2）Poroshell 120色譜柱因為具有極小的粒徑分布和擴散路徑，減小了軸向和縱向擴散，大大提高了柱效。該色譜柱具有更高的分離效率，在更高流速條件下，仍保持分離性能。故提高流速至2ml/min，根據公式2算出理論梯度洗脫時間。根據該方法進行紅參中人參皂苷Rg1、Re和Rb1的分離（色譜圖見圖2、測試結果見表4）。人參皂苷Rg1、Re的分離度達到2.501，理論塔板數以人參皂苷Rg1峰計為11192，此時系統壓力最大值達到449bar，分析時間由原來的67min減至34min。
公式2，其中：Timecol.i：梯度洗脫時間（i=1、2）；Flowcol.i：流速（i=1、2）
色譜柱的選擇
本實驗選擇了3種色譜柱，對于常規色譜柱Rigol Compass C18 (250mm×4.6mm×5μm)和Rigol Compass C18（2）(150mm×4.6mm×5μm)，人參皂苷Rg1和Re的分離度均達到藥典要求，方法重復性好，但分析時間過長，在質控、含量測定時消耗了大量時間與資源。選擇Agilent Poroshell 120 EC (100mm×4.6mm×2.7μm)色譜柱時，方法重復性高，分離度好，分析時間減少至67min，反壓僅為207bar，適用于大部分HPLC。Poroshell色譜柱在高流速下仍保持較高的分離效率，故調高流速至2ml/min，相應轉換梯度分離條件。提高流速后，人參皂苷Rg1和Re的分離度達到2.501，分析時間僅為34min。
色譜條件的優化
本實驗在測試過程中發現系統反壓隨著進樣次數的增加而逐漸增加。進行紅參重復性測試后，人參皂苷Rg1、Re、Rb1的定性重復性分別為0.29%、0.15%、0.03%；定量重復性分別為0.33%、0.37%、0.28%。因紅參樣品基質復雜，而藥典中給定方法有機相組成最高時為40%，隨著進樣次數的增加，有些雜質不能完全從色譜柱中洗脫，造成了反壓逐漸增大的現象。當在原有方法基礎上添加高有機相（90%B）洗脫10min后測試，人參皂苷Rg1、Re、Rb1的定性重復性分別為0.11%、0.06%、0.05%；定量重復性分別為0.19%、0.17%、0.16%。優化過的色譜條件一方面提高了譜圖重復性，另一方面提高了色譜柱的耐用性。
小結
采用3種色譜柱進行紅參中人參皂苷Rg1、Re、Rb1的分離均可達到藥典要求，且梯度時間由100min減至34min，大大提高了效率并節省了溶劑，為紅參的質控提供了一定依據。