用Syber Green方法做完PCR后,用來判斷產物是否相對專一。反應結束后,逐漸加溫。和Syber Green分子結合的PCR產物隨溫度升高逐漸變為單鏈,就不能在和Syber Green結合。一般每加溫一度,讀一次信號。當溫度到達PCR產物的Tm時,產物解離一下增多。曲線的橫坐標是溫度,而縱坐標是熒光信號的變化!開始加熱,信號變化不大,所以幾乎是平的,接近Tm時,突然變化加大,所以出現峰值。再升溫,產物全部解離,就又是一條直線了。
如果有非特異性產物,在加熱過程中就會出現一些比較矮,寬的峰。