ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay)
現在ELISA是食品工業和政府食品管理部門進行食品中潛在過敏原檢測和定性最常用的方法,用這種方法特定的蛋白或抗原可以與特定的酶標記的抗體鍵合后用顯色反應來定性和定量,靠標準曲線來計算抗原的含量。
ELISA的檢測方式有兩種:競爭式(competitive)ELISA法和夾心式(sandwich)ELISA法,后者是最常用的食物過敏原的免疫評價方法。
夾心式ELISA方法是用固定在固定相上的捕獲抗體,樣品中特定的蛋白被第一個抗體捕獲,然后被第二個特定的以酶標記的抗體檢出,而第二個抗體與被分析物鍵合,從而形成夾心式。與第二個抗體相連的酶與特定的底物反應形成有顏色的產物,它的吸收峰與被分析物的濃度線性相關。此種方法用于多種食物過敏原的檢測,有多種檢測工具包上市。
競爭式ELISA方法是測定相對較小蛋白質優先選擇的方法。它包含一個鍵合在固定相上的固定抗原,血清和一定比例稀釋樣品提取物(作為抑制劑)培養后添加到固相抗原上。如果樣品中沒有抗原出現,酶標記的抗體表現出與固定相上鍵合的抗原的最大鍵合能力,形成的有顏色的產物的最大吸收。因為樣品中的抗體抑制酶標記的抗體與固定的抗原的鍵合,吸收峰與樣品中抗原的濃度成反比。有報道,使用競爭式ELISA方法對某些食物過敏原的檢測極限可以低至0.4μg kg-1。
纖維素試紙測試
纖維素試紙測評是近年來發展起來可以代替ELISA方法的一種測試方法,它具有價格低、快速、方便攜帶、無須儀器設備、操作簡便等特點。目前,試紙測試只是定性方法,有改進的用于測定雞蛋中過敏原的試紙測定方法,具有高度的專一性和靈敏度,檢測限低至0.02 mgkg-1。