靶細胞殺傷實驗：LDH法

一、效應細胞的制備

激惹5天后，于無菌條件下取出受鼠引流的腹股溝淋巴結，100目鋼網研磨，調整細胞濃度為2×10⁷.ml^-1。臺盼藍色要求存活率>95%。

二、靶細胞的制備

P815細胞株系DBA/2小鼠的肥大細胞瘤細胞株。連續傳代培養，調整細胞濃度為2×10⁵/ml或3.33×10⁵/ml（加入α-Lyt2 mAb時的靶細胞濃度），臺盼藍染色成活率>95%。

三、LDH釋放法測定CTL的功能

按表1加樣于96孔培養板中，設3個復孔。混勻置二氧化碳培養箱中孵育4h。室溫離心，用微量加樣器每孔取上清液100μl，送全自動生化分析儀測定每孔的LDH含量。

表1　LDH釋放法測定CTL活性的加樣情況（μl）

注：靶細胞濃度為3.33×10⁵/ml

四、計算CTL活性

特異殺傷率(%)=(實驗孔LDH值-自然釋放孔LDH值)/(最大釋放孔LDH值-自然釋放LDH值)

五、統計學處理

DTH的測定，4組間比較采用方差分析，兩組比較采用q檢驗。對于CTL的特異殺傷率，先進行百分數的平方根反正弦轉換后采用方差分析進行4組間比較，兩兩比較采用q檢驗。