用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.27%磷酸二氫鉀溶液（用2.2%的氫氧化鉀溶液調節pH值至6.5）－甲醇（30：70）為流動相；檢測波長為340nm。取阿米卡星對照品和雜質A對照品各適量，加水溶解并稀釋制成每1mL中各含100μg的混合溶液，精密量取0.2mL至10mL量瓶中，加1.0%的2,4,6-三硝基苯磺酸溶液2.0mL、吡啶3.0mL，密塞，強力振搖30秒，置75℃水浴保溫45分鐘，在冷水中冷卻2分鐘，加冰醋酸2.0mL，密塞，強力振搖30秒，作為系統適用性試驗溶液。取20μL注入液相色譜儀，阿米卡星峰與雜質A峰的分離度應不小于3.5；理論板數按阿米卡星峰計算不低于3500。