單個細胞培養又稱克隆化。細胞克隆化一般至少進行3～5次。克隆化有以下幾種方法：
(一)顯微操作法
直觀可靠，但操作時間過長，容易增加污染機會。
(二)有限稀釋法
操作簡單，出現率高，為實驗室最常用的方法。
(三)熒光激活細胞分選儀
先進、高效、高純度、昂貴。
(四)軟瓊脂平板法
本法缺點是瓊脂融化溫度較難掌握，過高會導致細胞死亡，過低使細胞分布不均勻，操作較復雜，克隆出現率不穩定。
雜交瘤細胞應及時凍存，以保證細胞不會因污染或過多傳代變異丟失染色體而喪失功能。目前均采用液氮保存細胞。(注意逐步降溫、快速復溫)