間充質干細胞的凍存

實驗概要

間充質干細胞的凍存

主要試劑

DPBS、0.05%胰蛋白酶胰蛋白酶、間充質干細胞培養液、凍存液

主要設備

培養皿、15 mL離心管、凍存管、程序降溫盒

實驗步驟

（1）37℃預熱間充質干細胞培養液和0.05%胰蛋白酶，4℃預冷凍存液。
（2）同間充質干細胞傳代第（2）～（5）步。
         （2）棄掉舊培養液，加入室溫放置的DPBS洗一遍，盡可能將殘留的培養液洗凈，吸去DPBS。
          （3）加入適量（蓋住皿底即可）0.05%胰蛋白酶，37℃培養箱內孵育消化2～3 min。
           （4）倒置顯微鏡下觀察細胞變圓、漂起，可加等量間充質干細胞培養液終止消化。
             （5）輕柔吹打細胞，收集細胞懸液到15 mL離心管中，室溫1000 r/min離心3 min，棄上清。
（3）加入4℃預冷的凍存液，吹打混勻。
（4）分裝入事先寫好細胞信息（細胞名稱、代次、細胞量、凍存人、凍存日期等）的凍存管。