試劑、試劑盒 退火緩沖液B&W(結合洗脫）緩沖液dNTP溶液甲酰胺染液羥胺KMnO4 TEAC嘧啶Taq DNA聚合酶Taq DNA聚合酶緩沖液待測和對照基因組DNA
儀器、耗材 磁力架微孔滴定板或微管振蕩器鏈霉抗生物素蛋白包被的磁珠熱循環儀
實驗步驟
一、材料
1. 緩沖液、溶液和試劑
（1）退火緩沖液，2X: 1.2mol/LNaCl12 mmol/LTris-HCl、pH7.5 和 14 mmol/LMgCl2。高壓滅菌，室溫保存。
（2）B&W(結合洗脫）緩沖液：10mmol/LTris-HCl、pH7.5，1mmol/LEDTA和2.0mol/LNaCl。高壓滅菌，室溫保存。
（3）dNTP溶液（含4種dNTP，每種10 mmol/L)。
（4）甲酰胺染液：0.2 ml右旋糖酐（50 mg/ml) 加0.8ml甲酰胺配成1ml染液，每份樣品用 1.5ul染液。
（5）羥胺。在通風櫥中按如下步驟準備羥胺溶液。
在玻璃管中用 1.6 ml水溶解1.39 g固體羥胺，熱水中輕搖。逐滴加入lml二乙胺, 緩慢加入750ul羥胺調節pH到6左右。為準確測定pH, 加 2滴羥胺溶液到2 ml水中。注意不要直接將電極放到未稀釋的羥胺溶液中。溶液在4°C可保存7?10天，一20°C可儲存6個月。
（6）KMnO4/TEAC，在3mol/LTEAC(氯化四乙銨）中溶解100 mmol/LKMnO4
(方法A中選用）。
（7）哌啶，10%。
2. 酶和酶緩沖液
Taq DNA聚合酶
Taq DNA聚合酶緩沖液，10X(與酶一起提供）
3. 核酸和寡核苷酸
待測和對照基因組DNA
4. 特殊設備
與篩選管或微孔滴定板系統相配套的磁力架
聚乙烯或聚丙稀材料的微孔滴定板或微管（如AdvancedTechnologies或Nunc)
聚碳酸酯不能耐受碾啶。
振蕩器，室溫下使用
鏈霉抗生物素蛋白包被的磁珠（DynabeadsM-280Norway)
熱循環儀
二、方法A: 放射標記反應
以下是制備放射性標記探針的方案。用p53腫瘤抑制基因中的5號外顯子作為靶DNA。
擴增待測 DNA使用同樣的步驟（不含[a-32P]dCTP)。
(一）附加材料
1. 緩沖液、溶液和試劑
甲酰胺染液
H3PO4(1mol/L)
四氧化鋨*(Sigma-Aldrich)緩沖液，按下面配備。
100 mmol/LTris-HCl、pH7.7，10mmol/LEDTA,15% 嘧啶。通風櫥中，先在玻璃瓶中加入12.5 ml滅菌雙蒸水（ddH20), 然后打碎一管0.5 g的四氧化鋨，再將瓶子放到帶有鏢絲旋蓋的容器中，確保蓋子緊閉。四氧化鋨在塑料中不活潑。纏繞鋁箔后在4°C下溶解2~3天，4°C儲存。使用前用ddH20按1:5稀釋即可。四氧化鋨溶液可在-20°C儲存6個月。當與嘧啶反應時出現黃色說明反應成功，若儲存液(通常2個月后）呈現綠色或灰色，則應重新配制。
四氧化鋨溶液（在H20中1:5)
2. 核酸和寡核苷酸
5A: 5‘-TTCAACTCTGTCTCCTTCCTCTTCC-3’
5B：5‘-CTGGGGACCCTGGGCAACC-3’
在一套引物中，正義引物用生物素標記；另一套引物中，反義引物用生物素標記。
3. 放射性混合物
[a-32P]dCTP(50uCi)(1Ci=3.7X1010Bq)
4. 特殊設備
Geiger計數器
溫育或水浴，預置 37°C、42°C、90°C
磁力架，預冷
5. 附加物品
常用聚丙烯酰胺凝膠電泳設備及試劑（測序膠）
瓊脂糖凝膠電泳設備及試劑，溴化乙錠
Qiaquickspincolumns或類似設備，用來從球脂糖凝膠中純化DNA
四氧化鋨可用溶有100 mml/L高錳酸鉀（KMn04)的3mol/LTEAC(氯化四乙銨）溶液替換。高錳
酸鉀溶液應現配現用。3mol/L的TEAC在-4°C下可儲存3個月。