酶與抗體的偶聯實驗

實驗材料 抗體

試劑、試劑盒 磷酸鈉HRPO碳酸鹽緩沖液過碘酸鈉SASTrisEDTABSA甘油

儀器、耗材 透析膜離心機

實驗步驟

1.  濃度≥1 mg/ml 抗體溶液對2 l 0.1 mol/l pH6.8的磷酸鈉緩沖液透析，于4℃緩慢搖動下過夜。

2.  10 mg HRPO溶解于1 ml 0.1 mol/l pH9.2的碳酸鹽緩沖液，取0.25 ml 加入0.25 ml 新配制的NaIO4溶液中，蓋緊混勻，于室溫下避光放置2 h。

3.  取透析后的抗體溶液1 ml。加至得自步驟2的全部混合液中，置入裝有玻璃棉的巴斯德吸管中，將管尖用Parafilm封口膜封好。加0.25 g Sephadex G-25 室溫下避光放置3 h。

4.  柱子用0.75 ml 碳酸鹽緩沖液流洗，以洗脫偶聯物。加38 μl 新配制的NaBH4溶液至洗脫物中，室溫于避光放置30 min。

5.  加112 μl 新配制的NaBH4溶液避光放置60 min，加0.9 ml 飽和硫酸銨（SAS）。溶液于4℃下溫和振搖30 min。

6.  于4℃，10 000 g 離心15 min，棄上清。沉淀重懸于0.75 ml TEN緩沖液中，裝入透析袋中于4℃下對2 l TEN緩沖液透析過夜。換TEN緩沖液再繼續透析4 h。

7.  從透析袋中取出偶聯物，加BSA至20 mg/ml。加等體積甘油，于-20℃保存。