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    發布時間:2022-11-20 14:09 原文鏈接: 酵母雙雜交系統的研究過程

    Fields等人的工作標志雙雜交系統的正式建立。他們以與調控SUC2基因有關的兩個蛋白質Snf1和Snf2為模型,將前者與Gal4的BD結構域融合,另外一個與Gal4的AD結構域的酸性區域融合,由BD和AD形成的融合蛋白一般分別稱之為“誘餌”(bait)和“獵物”或靶蛋白(prey or target protein)。

    如果在Snf1和Snf2之間存在相互作用,那么分別位于這兩個融合蛋白上的BD和AD就能重新形成有活性的轉錄激活因子,從而激活相應基因的轉錄與表達。這個被激活的、能顯示“誘餌”和“獵物”相互作用的基因稱之為報告基因(reporter gene)。通過對報告基因表達產物的檢測,反過來可判別作為“誘餌”和“獵物”的兩個蛋白質之間是否存在相互作用。

    在此Fields等人采用編碼β-半乳糖苷酶的LacZ作為報道基因,并且在該基因的上游調控區引入受Gal4蛋白調控的GAL1序列。這個改造過的LacZ基因被整合到酵母染色體URA3位上。

    而酵母的GAL4基因和GAL80基因(Gal80是Gal4的負調控因子)被缺失,從而排除了細胞內源調控因子的影響。已經知道在Snf1和Snf2之間存在相互作用。

    結果發現只有同時轉化了Snf1和Snf2融合表達載體的酵母細胞才有β-半乳糖苷酶活性,單獨轉化其中任何一個載體都不能檢測出β-半乳糖苷酶活性。

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